[发明专利]肽标签及包含它的带有标签的蛋白质

说明书

本发明以具有下述序列的肽作为肽标签附加于有用蛋白质上而使之表达。X_m(PY_n)_qPZ_r。此处，X、Y及Z分别是独立地选自R、G、S、K、T、L、N、Q、H中的氨基酸残基，Y中的至少1个包含K、L、N、Q、H或R。m为0～5的整数，n为1、2或3，q为1～10的整数，r为0～10的整数。

技术领域

本发明涉及肽标签及包含它的带有标签的蛋白质、编码该蛋白质的DNA、以及包含该DNA的转化体。

背景技术

随着基因重组技术的发展，目前通常进行基于异种表达的有用蛋白质的生产。在基于异种表达的有用蛋白质的生产中，作为提高蛋白质的表达、蓄积量的对策，研究了启动子及终止子的选择、翻译增强子、导入基因的密码子改变、蛋白质的细胞内运输及局域化等。例如，专利文献1中公开了在植物等中表达细菌毒素蛋白质的技术，公开了用以一定间隔配置有脯氨酸的肽接头连结细菌毒素蛋白质来实施表达(专利文献1)。

另外，除此以外还开发了多个通过使肽标签连结于目标蛋白上而提高其表达的技术(专利文献2、非专利文献1～4)。这些肽标签连结技术大部分是提高目标蛋白的溶解性、抑制细胞内的包涵体的形成、促进目标蛋白的正常表达的技术，并非是以提高蛋白质的表达量为目的的技术。另外，其多数适用于主要使用了大肠杆菌的表达系统。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本专利5360727号说明书

专利文献2：日本专利5273438号说明书

非专利文献

非专利文献1：Smith，D.B.and Johnson，K.S.，：Gene，67，31，1988

非专利文献2：Marblestone，J.g.et al.：Protein Sci.，15，182，2006

非专利文献3：diguan，C.et al.：Gene，67，21，1988

非专利文献4：Maria.C.V.et al.：Gene，74，365-373，1988

发明内容

发明所要解决的问题

通过使用专利文献1中公开的将脯氨酸以一定间隔配置的肽接头来连结毒素蛋白质，能够实现毒素融合蛋白质在植物内的高蓄积化。然而，该肽接头虽然作为连结多个蛋白质的接头的有用性高，然而作为以单一的目标蛋白的高表达为目的的肽标签的能力没有得到充分地研究，存在有研究的余地。因而，本发明的课题在于，提供一种肽标签，在宿主细胞中表达目标蛋白的情况下，可以通过使之与该目标蛋白结合而增加目标蛋白的表达量。

用于解决问题的方法

本发明人等为了实现专利文献1中公开的连接肽的作为蛋白质高表达用肽标签的性能提高，首先着眼于该肽(PG12及PG17)中的脯氨酸的存在，预测通过将存在于脯氨酸(P)与脯氨酸(P)之间的丝氨酸(S)和甘氨酸(G)利用物理化学性质与它们不同的氨基酸置换，或许能进一步提高这些肽所具有的有益的性质。具体而言，准备将肽中的丝氨酸(S)、甘氨酸(G)置换为赖氨酸(K)、精氨酸(R)等碱性氨基酸、或天冬氨酸(D)、谷氨酸(E)等酸性氨基酸、以及丙氨酸(A)、苏氨酸(T)、亮氨酸(L)、蛋氨酸(M)、天冬酰胺(N)、谷氨酰胺(Q)等立体性或极性不同的在侧链中不具有电荷的氨基酸的肽标签，使它们与目标蛋白融合，由此尝试了目标蛋白的表达提高。其结果是发现，通过在PG12、PG17中将存在于P与P之间的S和G置换为K、L、N、Q或R，将所得的肽附加到目标蛋白上，会提高目标蛋白的表达量。本发明是基于此种见解而完成的。

即，本发明如下所示。

[1]一种肽，其具有下述的序列。