[发明专利]用于治疗角膜营养不良的方法

说明书

提供了用于治疗有此需要的受试者中的角膜营养不良的方法和组合物。在一方面，方法包括以下步骤：从受试者获得包含角膜营养不良靶核酸中的核酸突变的多个干细胞，并且操作多个干细胞的一个或多个干细胞中的核酸突变以校正核酸突变，从而形成一个或多个经操作的干细胞。分离经操作的干细胞，然后移植到受试者中。在一些实施方案中，使用CRISPR系统操作核酸突变。

发明领域

本公开一般涉及用于治疗角膜营养不良的方法。具体地，本公开涉及用于治疗与遗传突变有关的角膜营养不良的方法。

发明背景

角膜营养不良是眼外层(角膜)的一组遗传性病症。例如，角膜营养不良可以以角膜，即眼的透明前部中的物质的双侧异常沉积为特征。角膜营养不良包括但不限于角膜营养不良的以下四种IC3D类别(参见例如Weiss et al.,Cornea 34(2):117-59(2015))：上皮和上皮下营养不良、上皮-基质TGFβI营养不良、基质营养不良和内皮营养不良。角膜营养不良可以由位于转化生长因子、β诱导(TGFβI)、角蛋白3(KRT3)、角蛋白12(KRT12)、GSN或含有UbiA异戊烯转移酶域1(UbiA prenyltransferase domain containing 1,UBIAD1)中的突变引起。

例如，已知此类角膜营养不良的亚组，上皮-基质角膜营养不良，与转化生长因子β诱导(TGFβI)基因中的突变相关。TGFβI基因编码结合I型、II型和IV型胶原的含有精氨酰-甘氨酰-天冬氨酸(RGD)的蛋白质。RGD基序存在于许多调节细胞粘附的胞外基质蛋白中，并充当几种整联蛋白的配体识别序列。在一些情况下，上皮-基质角膜营养不良基于不透明度的临床表现、疾病的临床特征以及沉积物的组织病理学染色特性彼此区分，并且而分为亚型。不受任何特定操作理论的束缚，认为TGFβI基因中的特定突变导致与此类角膜营养不良相关的特定表型，并且导致不同表型的临床特征的角膜不透明度源自整个或部分的突变编码TGFβI蛋白的沉积。阿维利诺(Avellino)角膜营养不良，又称颗粒状角膜营养不良II型，是一种上皮-基质角膜营养不良形式，以表面中央角膜基质中的不规则形状、界限清楚的颗粒状沉积物和进行性视力损伤为特征。患有阿维利诺角膜营养不良的杂合患者随着年龄具有增加的视力丧失，在生命的晚年变得严重。与之相对的，纯合患者在6岁龄时有严重到完全的视力丧失。

圆锥角膜(KTCN)是最常见的角膜扩张性病症，约6-23.5％受试者携带阳性家族史(Wheeler,J.,Hauser,M.A.,Afshari,N.A.,Allingham,R.R.,Liu,Y.,Reproductive SysSexual Disord 2012；S:6)。报告的KTCN流行率的范围为每100,000之8.8至54.4。流行率的此种变化部分由于用于诊断该疾病的不同标准。(Wheeler,J.,Hauser,M.A.,Afshari,N.A.,Allingham,R.R.,Liu,Y.,Reproductive Sys Sexual Disord 2012；S:6；和Nowak,D.,Gajecka,M.,MiddleEast Afr J Ophthalmol 2011；18(1):2-6)。在文献内存在许多试图确限定KTCN遗传原因的研究。这些研究发现了许多可能的遗传变体或单核苷酸多态性(SNPs)，据信它们根据实验参数对疾病的病因起作用。在圆锥角膜过程中，中央或旁中央角膜经历逐渐变薄和变峭(steepening)，导致不规则散光。遗传模式既不突出也不可预测，但报告了阳性家族史。经常报告圆锥角膜的发病率为2000人之一。圆锥角膜可以显示以下病理学发现，包括鲍曼层的碎裂、基质变薄和上覆的上皮、德斯密(Descemet)氏膜中的折叠或断裂、以及可变量的弥漫性角膜瘢痕形成。

最初用高渗眼药水和软膏治疗角膜营养不良的早期阶段以减少角膜水肿，并且可以在手术干预之前提供症状改善。由角膜营养不良引起的次优视力通常需要角膜移植的形式的手术干预。然而，供体角膜组织可用性的短缺限制了外科手术的使用。另外，然而，供体移植物中的疾病复发可能在角膜移植后发生。角膜移植后可能出现的其它并发症包括例如瘢痕形成、白内障形成、从移植切口渗漏液体、感染和视力问题。因此，需要治疗角膜营养不良的替代方法。