[发明专利]表征细胞特异性微囊泡的方法

说明书

本发明涉及用于表征和/或测量和/或分选心脏衍生微囊泡的量的方法，其包括在获得自对象的分离生物样品中检测微囊泡上CD172a标志物的步骤。

技术领域

本发明涉及用于表征、定量和分选循环细胞特异性微囊泡(MV)，特别是心脏衍生MV的方法。

本发明还涉及这样的方法，其通过表征、定量和分选循环心脏衍生微囊泡(MV)，用于对疾病，特别是心血管疾病进行诊断和/或评估成病风险和/或预后和/或监测进展和/或监测治疗性处理的功效和/或筛选治疗性处理。

背景技术

在所有经济发达的国家，心血管疾病仍然是在成人中导致发病率和死亡率的主要原因。由于这些疾病潜在的病理过程的异质性，鉴定与心血管疾病的高风险相关的明确生物标志物很大程度上仍然难以捉摸。因此，构建能够改善心血管疾病(CVD)早期检测的新型技术方法可以带来对于患者更精确的干预和治疗。

胞外囊泡(EV)是细胞间通信的关键因素，并且在基础或应激条件下释放。

EV包括凋亡小体(AB)、微囊泡(MV)和外泌体，其源自不同的亚细胞隔室[Raposo,等J Cell Biol.2013年2月18日；200(4):373-83]。具体而言，MV在与质膜融合后由其起源细胞释放。值的注意的是，循环MV的表征可以改善针对症状发生前疾病的病理生理学信息，从而对患者风险分级以及候选治疗途径更好的评估。

缺乏用于选择性表征和定量循环心脏衍生MV的方法是难以将该技术应用于疾病分期(disease staging)和预测急性事件的限制因素。

因此，人们仍然需要用于选择性地表征和定量心脏衍生MV的方法。

发明内容

本申请发明人发现，处于应激条件下时，循环细胞特异性微囊泡(MV)，特别是心脏衍生MV水平是心血管系统病理状态的可靠指标。

事实上，本申请发明人发现，经过称之为经导管主动脉瓣植入术(TranscatheterAortic Valve Implantation，TAVI)的微创性手术之后，循环心脏衍生MV和循环内皮细胞衍生MV浓度急剧下降。这一“原理论证”具有病理生理学价值。

本申请发明人开发了一种简单、准确且强大的工具，用于针对疾病预测、分期和药物响应性来表征、定量和分选循环组织衍生MV，主要集中于心脏衍生MV。

发明人将其方法基于依序步进式门控策略，该门控策略使用多色流式细胞术(FACS)。发明人对FACS分析进行优化以同时表征、定量和分选循环组织衍生MV，包括AB和/或膜碎片。

本发明的方法可以被用于对患有心力衰竭、心肌症和瓣膜病的患者进行分期，并且在患有急性冠状动脉综合征患者中预测疾病严重性，包括对主要不良心脏结果具有预后/预测作用的药物响应性概况。

值的注意的是，本方法不仅可以在严格意义上的CVD中进行，也可以在其它病变诸如自身免疫疾病(类风湿性关节炎、关节炎牛皮癣、风湿性多肌痛、狼疮、硬皮病自身免疫性紊乱等等)中进行。

心血管并发症是自身免疫疾病的主要消极结果，原因可以是炎症状态或药物响应性。

此外，许多癌症疗法(即，乳腺癌、霍奇金淋巴瘤等)诱导心脏毒性，其可能导致心力衰竭和其它心血管消极结果。

本发明的方法高度适用于与CVD直接(即，心力衰竭)和/或间接(即，个体药物响应)紧密关联的不同方面，主要意义在于临床管理和个性医疗。

本方法使用抗CD172a抗体能够准确区分循环心脏衍生MV，而此前未见抗CD172a抗体与心肌衍生MV关联。临床主要主要采用心肌损伤(如肌钙蛋白T(cTnT))或心力衰竭(如NT-proBNP)的常规生物标志物，然而它们在许多医学病理条件中性能不佳。