[发明专利]载脂蛋白检测方法

权利要求书

1.用于检测和/或定量样本中的选自apoAI、apoAIV、apoCI、apoCII、apoCIII、apoE和apoJ(丛生蛋白)的载脂蛋白或其同种型的体外方法，其包含：

(i)在适合于将载脂蛋白或其同种型结合到聚苯乙烯表面或聚碳酸酯表面的条件下,使样品与所述表面接触，其中，所述表面不含与所述载脂蛋白或其同种型结合的特异性抗体，

(ii)在适合于抗体和载脂蛋白或其同种型之间形成复合物的条件下，使步骤(i)中形成的与载脂蛋白或其同种型结合的表面和所述载脂蛋白或其所述同种型的特异性抗体接触，以及

(iii)检测步骤(ii)中形成的复合物，

其中，所述聚苯乙烯表面或聚碳酸酯表面与样品接触之前不进行处理或在接触样品之前以白蛋白封闭。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述载脂蛋白同种型为apoE4。

3.用于确定样品中的选自apoAI、apoAIV、apoCI、apoCII、apoCIII、apoE和apoJ(丛生蛋白)的给定的载脂蛋白的同种型相对于样品中所述载脂蛋白总含量的相对量的体外方法，所述方法包括：

(i)在适合于将载脂蛋白结合到聚苯乙烯表面或聚碳酸酯表面的条件下,使样品与所述表面接触，其中，该表面不含与所述载脂蛋白结合的特异性抗体，

(ii)使步骤(i)形成的与载脂蛋白结合的表面和所述载脂蛋白同种型的特异性第一抗体接触，且和能够结合存在于样品中的所述载脂蛋白的所有同种型的第二抗体接触，其中，所述接触在适合于形成第一复合物和第二复合物的条件下进行，所述第一复合物包括第一抗体和所述载脂蛋白同种型，所述第二复合物包括第二抗体和所述载脂蛋白的所有同种型，

(iii)检测步骤(ii)中形成的第一和第二复合物以及

(iv)基于步骤(iii)中获得的第一和第二复合物的水平测定所述同种型相对于总载脂蛋白含量的相对量，

其中，所述聚苯乙烯表面或聚碳酸酯表面与样品接触之前不进行处理或在接触样品之前以白蛋白封闭。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(i)中使用的表面由多个实体形成，步骤(ii)中与第一抗体和第二抗体的接触在不同的容器中进行，每个容器包含形成所述表面的所述多个实体的一部分，并且步骤(iii)中的所述检测分别在每个容器中进行。

5.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述载脂蛋白为apoE且所述载脂蛋白同种型为apoE4。

6.用于确定与对象中选自apoAI、apoAIV、apoCI、apoCII、apoCIII、apoE和apoJ(丛生蛋白)的载脂蛋白的载脂蛋白同种型表达相关的单倍型的等位基因剂量的方法，所述方法包括，

(i)在适合于将载脂蛋白同种型结合到聚苯乙烯表面或聚碳酸酯表面的条件下，使含蛋白样品与所述表面接触，所述样品来源于所述对象的表达载脂蛋白同种型的组织，其中，所述表面不含与所述载脂蛋白同种型结合的特异性抗体，

(ii)在适合于所述抗体和所述载脂蛋白同种型之间形成复合物的条件下，使步骤(i)中形成的与载脂蛋白结合的所述表面和至少一种载脂蛋白同种型的特异性抗体接触，

(iii)通过将步骤(ii)中形成的复合物的量与编码所述基因变体的等位基因的数量相关联来确定载脂蛋白同种型的等位基因剂量，

其中，所述聚苯乙烯表面或聚碳酸酯表面与样品接触之前不进行处理或在接触样品之前以白蛋白封闭。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，编码载脂蛋白同种型的基因变体是编码载脂蛋白apoE4的同种型的基因。

8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述聚苯乙烯表面在结合步骤(i)之前被封闭，并且其中所述白蛋白是牛血清白蛋白(BSA)。

9.根据前述权利要求中任一项的方法，其特征在于，所述聚苯乙烯表面在结合步骤(i)之后用洗涤溶液处理。