[发明专利]昆虫防治的方法和组合物

说明书

本发明描述转录为RNA构筑体的重组DNA序列，所述RNA构筑体能够形成适合于昆虫防治应用的病毒样颗粒(VLP)。具体来说，本公开提供一种用于防治目标昆虫的方法，其包含转化微生物宿主，所述微生物宿主具有包含编码噬菌体衣壳蛋白的第一DNA序列和编码包含至少一个偶合至RNAi前体序列的噬菌体pac序列的RNA转录物的第二DNA序列；诱导所述微生物宿主表达所述第一和第二DNA序列；将包含所述衣壳蛋白和RNAi前体的病毒样颗粒(VLP)从所述微生物宿主分离；以及使分离的VLP与所述目标昆虫接触。

相关申请的交叉引用

本申请要求2015年12月31日提交的美国临时申请第62/273,654号的优先权，所述申请的全部公开内容以引用的方式并入。

序列表并入

“序列表”的纸印本和大小为27千字节且创建于2016年12月7日的名称为Insect_Control_Sequence_Listing_ST25.txt的序列表的计算机可读形式的全部内容以引用的方式并入本文中。

技术领域

本发明包含与病毒样颗粒(VLP)相关的方法和组合物，所述病毒样颗粒含有能够对目标昆虫产生RNAi介导的基因抑制效应的异源货物分子。此类组合物和方法在作物保护和昆虫防治的其它方面中具有应用。

背景技术

首先描述于线虫秀丽隐杆线虫(C.elegans)中的RNAi介导的基因抑制已显示为在许多其它生物体中调节基因表达的有效方法。Fire等人,秀丽隐杆线虫中通过双链RNA的强力和特定基因干扰(Potent and specific genetic interference by double-strandedRNA in Caenorhabditis elegans).《自然(Nature)》391:806(1998)。已由多个研究小组使用双链RNA(dsRNA)展示RNAi在防治影响作物的昆虫的增殖中的作用。综述于Ivashuta等人食草昆虫中的环境RNAi(Environmental RNAi in herbivorous insects).《核糖核酸(RNA)》21:840(2015)中。用于现有技术中描述的RNAi目的的重组RNA构筑体一般由约18至约25个碱基对的dsRNA(siRNA)组成，但也包括通常介于约100至约1,000个碱基对(bp)之间的较长dsRNA(长dsRNA)。为了将dsRNA成功地引入至昆虫中，需要长于或等于大致60bp的dsRNA以在供应于昆虫的饮食中时高效吸收。Bolognesi等人由西方玉米根虫(勒孔特西方玉米根叶甲)的幼虫肠细胞中的Snf7RNAi引起的超微结构变化(Ultrastructural ChangesCaused by Snf7RNAi in Larval Enterocytes of Western Corn Rootworm(Diabroticavirgifera virgifera Le Conte))《公共科学图书馆·综合(PLoS One)》7:e47534(2012)。长dsRNA分子通过宿主的Dicer酶复合物在体内裂解成siRNA的多样群体。或者，RNAi基因抑制也可以通过反义RNA针对特定序列的作用，经由相关过程而发生。防治田间昆虫的RNAi方法的实际应用受到体外RNA合成的成本和RNA，甚至dsRNA对环境和酶降解的化学脆弱性限制。