[发明专利]一种脱细胞猪角膜的制备方法及其脱细胞板层角膜和用法

权利要求书

1.一种猪脱细胞板层角膜的制备方法，至少如下步骤：

S1、预处理：对新鲜猪角膜的预处理包括如下处理：

S1.1取新鲜猪角膜，去除上皮层；

S1.2制备板层角膜；所述板层角膜仅包括前弹力层和基质层；

S1.3清洗干净；

S2:干燥处理：将预处理后板层角膜进行干燥处理；

S3:脱细胞处理：将干燥处理后角膜进行脱细胞处理：

S3.1酶处理：采用DMEM培养基配置全能核酸酶溶液；将干燥后角膜加入上述酶溶液；置于震荡培养箱中震荡不小于1小时；

S3.2清洗：将角膜加入清洗溶液中，置于震荡培养箱震荡洗涤处理，获得脱细胞角膜；

S4：干燥角膜制备:将脱细胞处理后对角膜进行干燥处理，制备成含水率含水量为5％-20％的干燥角膜；

S5:灭菌处理：采用钴60辐照灭菌，辐照剂量不大于25kgy。

2.如权利要求1所述的猪脱细胞板层角膜的制备方法，其特征在于，在S1.2步骤中取板层角膜厚度为300um～700um。

3.如权利要求1所述的猪脱细胞板层角膜的制备方法，其特征在于，所述配制的全能核酸酶溶液的浓度为100U～1000U/mg。

4.如权利要求1所述的猪脱细胞板层角膜的制备方法，其特征在于，角膜的清洗溶液为蒸馏水或氯化钠溶液或pH6.0至8.0的缓冲溶液。

5.如权利要求1所述的猪脱细胞板层角膜的制备方法，其特征在于，角膜在酶溶液中的震荡处理温度20-30℃。

6.如权利要求1所述猪脱细胞板层角膜的制备方法，其特征在于，角膜在酶溶液中的震荡频率为每分钟50-80次。

7.如权利要求1所述猪脱细胞板层角膜的制备方法，其特征在于，角膜在震荡洗涤过程中的温度10-20℃。

8.如权利要求1所述猪脱细胞板层角膜的制备方法，其特征在于，角膜在洗涤过程中的震荡频率为每分钟120～160次。

9.如权利要求4所述猪脱细胞板层角膜的制备方法，其特征在于，所述清洗用氯化钠溶液浓度为0.9％。

10.如权利要求1所述猪脱细胞板层角膜的制备方法，其特征在于，所述钴60辐照灭菌采用低温辐照；将角膜置于填充有制冷剂的保温容器中进行辐照灭菌；通过制冷剂使得角膜在辐照全过程中保持在低于0℃的低温状态下。

11.如权利要求10所述猪脱细胞板层角膜的制备方法，其特征在于，所述的制冷剂是冰或干冰。

12.如权利要求10或11所述猪脱细胞板层角膜的制备方法，其特征在于，所述角膜低温辐照灭菌全程中温度不得高于0℃。

13.如权利要求11所述的一种猪脱细胞板层角膜的制备方法，其特征在于，所述在进行辐照灭菌前，先将角膜进行单片密封包装，将密封包装后角膜置于低温制冷剂之中进行辐照。

14.如权利要求12所述的一种猪脱细胞板层角膜的制备方法，其特征在于，所述在进行辐照灭菌前，先将角膜进行单片密封包装，将密封包装后角膜置于低温制冷剂之中进行辐照。

15.如权利要求1所述的猪脱细胞板层角膜的制备方法，其特征在于，在脱细胞处理后对角膜进行干燥处理，制备成含水率含水量为5％-20％的干燥角膜。

16.如权利要求1或15所述的猪脱细胞板层角膜的制备方法，其特征在于，所述的干燥处理可采用真空干燥。