[发明专利]产生单磷酰脂质A的细菌和利用细菌产生单磷酰脂质A的方法

说明书

提供了产生单磷酰脂质A(MLA)的细菌和产生MLA的方法，所述细菌包括增加编码LpxE多肽的基因的表达的遗传修饰。根据本公开，可以以简单的方式产生MLA而无需酸水解和/或碱水解。

技术领域

一个或更多个实施例涉及产生单磷酰脂质A(MLA)的细菌以及利用该细菌产生MLA的方法。

背景技术

脂多糖(LPS)是革兰氏阴性菌的围绕肽聚糖的外膜的组分之一。LPS是包含脂质A和通过共价键与脂质A结合的多种多糖的分子。在LPS的组分中，脂质A(也被称为内毒素)负责革兰氏阴性菌的毒性。

脂质A是非常有效的免疫系统刺激剂，以皮克每毫升的量激活细胞(例如，单核细胞或巨噬细胞)。脂质A、脂质A的衍生物或脂质A的变体可以用作例如疫苗的组分，诸如佐剂。单磷酰脂质A(MLA)用作佐剂并且用于过敏原特异性免疫治疗和癌症的免疫治疗，或者也用于痴呆的预防和治疗。此外，在MLA中，六酰化单磷酰脂质A(六酰化MLA)、五酰化单磷酰脂质A(五酰化MLA)和3-O-脱酰基-4'-单磷酰脂质A(3D-MLA)在上述用途中有效。脂质A是在革兰氏阴性菌(诸如大肠杆菌)的膜中发现的脂质组分。膜中发现的脂质A与糖结合，诸如2-酮基-3-脱氧-D-甘露-辛酮糖酸(Kdo)。因此，为了获得游离形式的脂质A，应该将其与LPS的其它组分分离。例如，可以从细菌膜提取LPS，在酸存在下对LPS加热以去除Kdo和1-磷酸基团，从而获得脂质A；或者可以通过化学工艺来合成MLA。然而，这些方法的缺点在于它们在工艺步骤中复杂且产量低。

因此，需要开发一种产生MLA及其衍生物的方法，该方法比传统方法简单且不需要酸水解。

发明内容

技术问题

提供一种产生单磷酰脂质A(MLA)的细菌。

提供一种产生MLA的方法。

技术方案

本申请要求于2016年1月6日在韩国知识产权局提交的第10-2016-0001708号韩国专利申请的权益，该韩国专利申请的公开内容通过引用全部包含于此。

这里使用的术语“增加表达”是指某种基因的表达产物(例如，mRNA或细胞中由该基因编码的蛋白质)中可检测到的增加。这里使用的术语“亲本细菌细胞”是指不具有特定遗传修饰的相同类型的细菌细胞。当在遗传修饰中使用野生型细胞时，亲本细菌细胞可以是“野生型”细胞。例如，包括增加基因表达的遗传修饰的细菌可以具有水平比亲本细菌细胞的表达产物高大约5％或更多、大约10％或更多、大约15％或更多、大约20％或更多、大约30％或更多、大约40％或更多、大约50％或更多、大约60％或更多、大约70％或更多、大约80％或更多、大约90％或更多、大约95％或更多或者大约100％或更多的表达产物。细胞中表达产物的增加可以通过本领域已知的任何方法来验证。表达产物的水平可以通过测量诸如mRNA或蛋白质的表达产物的活性或量来确定。

这里使用的术语“减少表达”是指某种基因的表达产物(例如，mRNA或细胞中由该基因编码的蛋白质)中可检测到的减少。这里使用的术语“亲本细菌细胞”是指不具有特定遗传修饰的相同类型的细菌细胞。当在遗传修饰中使用野生型细胞时，亲本细菌细胞可以是“野生型”细胞。例如，包括减少基因表达的遗传修饰的细菌可以具有水平比亲本细菌细胞的表达产物低大约5％或更多、大约10％或更多、大约15％或更多、大约20％或更多、大约30％或更多、大约40％或更多、大约50％或更多、大约60％或更多、大约70％或更多、大约80％或更多、大约90％或更多、大约95％或更多或者大约100％或更多的表达产物。细胞中表达产物的减少可以通过本领域已知的任何方法来验证。表达产物的水平可以通过测量诸如mRNA或蛋白质的表达产物的活性或量来确定。