[发明专利]烟酰胺核糖苷的微生物生产

权利要求书

1.能够生产烟酰胺核糖苷(NR)的经遗传修饰的细菌，其中所述细菌包含至少一种选自以下的修饰：

a)添加异源烟酸酰胺化蛋白(NadE*)的活性；和

b)添加或提高烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)水解蛋白的活性，

其中与没有任何所述修饰的细菌相比，具有所述至少一种修饰的细菌产生提高量的NR。

2.权利要求1所述的细菌，其中所述细菌还包含一种或多种另外的选自以下的修饰：

a)阻断或降低通过抑制nadA基因、nadB基因、nadC基因或其组合的转录起抑制NAD+生物合成的作用的蛋白质的活性；

b)阻断或降低作为烟酰胺核糖苷转运蛋白起作用的蛋白质的活性；

c)阻断或降低作为烟酸单核苷酸腺嘌呤基转移酶起作用的蛋白质的活性；

d)阻断或降低作为烟酰胺单核苷酸酰胺水解酶起作用的蛋白质的活性；

e)阻断或降低作为嘌呤核苷磷酸化酶起作用的蛋白质的活性；

f)添加或提高作为烟酰胺单核苷酸水解酶起作用的蛋白质的活性；和

g)添加或提高作为L-天冬氨酸氧化酶、喹啉酸合酶、喹啉酸磷酸核糖基转移酶起作用的蛋白质或其组合的活性。

3.权利要求1或权利要求2所述的细菌，其中所述NadE*蛋白是包含以下氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1和3至18之任一的同一性为至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少97％或至少99％，其中所述多肽具有将烟酸单核苷酸转变为烟酰胺单核苷酸的烟酸酰胺化活性。

4.权利要求1或权利要求2所述的细菌，其中所述烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)水解蛋白是包含以下氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：66至70之任一的同一性为至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少97％或至少99％，其中所述多肽具有将NAD+转变为烟酰胺单核苷酸和腺嘌呤的NAD+水解活性。

5.权利要求1-4中任一项所述的细菌，其中NAD+生物合成的负调控因子是包含SEQ IDNO：51、52或53的氨基酸序列的多肽或所述多肽的变体，其中所述多肽具有抑制NAD+生物合成的活性。

6.权利要求1-4中任一项所述的细菌，其中所述烟酰胺核糖苷转运体是包含SEQ IDNO：54、55或56之任一的氨基酸序列的多肽或所述多肽的变体，其中所述多肽具有导入烟酰胺核糖苷的烟酰胺核糖苷转运活性。

7.权利要求1-4中任一项所述的细菌，其中所述烟酰胺单核苷水解酶是包含SEQ IDNO：57、58或59之任一的氨基酸序列的多肽或所述多肽的变体，其中所述多肽具有将烟酰胺单核苷酸转变为烟酰胺核糖苷的核苷水解酶活性。

8.权利要求1-4中任一项所述的细菌，其中所述烟酸单核苷酸腺嘌呤基转移酶蛋白是包含SEQ ID NO：63、64或65的氨基酸序列的多肽或所述多肽的变体，其中所述多肽具有将烟酸单核苷酸转变为烟酸腺嘌呤二核苷酸的烟酸单核苷酸腺嘌呤基转移酶活性。

9.权利要求1-4中任一项所述的细菌，其中所述烟酰胺单核苷酸酰胺水解酶蛋白是包含SEQ ID NO：60、61或62之任一的氨基酸序列的多肽或所述多肽的变体，其中所述多肽具有将烟酰胺单核苷酸转变为烟酸单核苷酸的烟酰胺单核苷酸酰胺水解酶活性。

10.权利要求1-4中任一项所述的细菌，其中所述嘌呤核苷磷酸化酶蛋白是包含SEQ IDNO：72至76之任一的氨基酸序列的多肽或所述多肽的变体，其中所述多肽具有将烟酰胺核糖苷和磷酸转变为烟酰胺和核糖-1-磷酸的嘌呤核苷磷酸化酶活性。