[发明专利]冷冻保存组合物以及其使用方法

说明书

冷冻保存组合物包括羧化聚氨基酸，以及至少一种有机两性试剂或多醣。还提供了冷冻保存的方法。

技术领域

本揭示內容有关适合生物样本的冷冻保存的组合物，以及特别地，包括羧化聚氨基酸，以及至少一种有机两性试剂或多醣的冷冻保存组合物。使用所述冷冻保存组合物的方法也描述在本文中。

背景技术

冷冻保存是通过冷却至低于零度的温度来保存生物样本如细胞或整个组织的过程。在如此低的温度，任何生物活力，包括通常会导致细胞死亡的生化反应，通常会被有效地阻止。冷冻保存有许多不同的研究和临床应用。举例来说，频繁的研究需要将细胞或组织样本以某种方式存储一段时间，以便保留其恢复生物活力的潜力，例如在细胞培养样本和杂交瘤(hybridoma)的情况下。另外，临床需要频繁保存和储存细胞，同时保留其潜在的生物活力，例如在自体骨髓移植，脐带血储存和人类配子储存的情况下。

然而，传统的冷冻保存技术可能会因冰晶的形成和解冻浓缩溶液的离子强度的增加而受到阻碍，这两者都会对生物样本造成损害。在冷冻保存的情况下维持细胞样本的生物活力的一种技术是使用二甲基亚砜(DMSO)作为冷冻保护剂，其功能是增加在冷却过程和随后的加热过程中皆存活的细胞的数量。DMSO通常以5％至15％v/v(体积/体积)(0.74至2.5摩尔)的终浓度使用。据信DMSO至少部分通过破坏冰晶形成过程起作用，从而减少细胞膜的物理破坏。但是，DMSO是有毒的，也可引起各种副作用。例如，接受过已保存在DMSO中的自体细胞移植的患者可能会出现副作用，包括头痛，恶心和皮疹。(Davis，J M等人，Blood，75(3)，1990，第781-786页)。另外，一些细胞受到与DMSO长时间接触的不利影响。

在冷冻保存的情况下维持细胞样本的生物活力的另一种技术是使用甘油作为冷冻保护剂。甘油通常以5至20％v/v的终浓度使用。尽管甘油对细胞的毒性通常低于DMSO，但甘油会引起渗透问题，特别是解冻后可影响细胞活力。

在冷冻保存情况下保持细胞样本的生物活力的另一种技术是使用聚乙二醇(PEG)。但是，大多数研究表明PEG与DMSO结合时效率最高，因此不能消除与DMSO相关的不良特性。此外，PEG经受超声降解，其副产物对哺乳动物细胞有毒。因此，本领域需要在与冷冻保存相关的冷冻和解冻循环期间保护细胞和组织。

发明内容

本揭示內容提供包括羧化聚氨基酸，以及至少一种有机两性试剂或多醣的冷冻保存组合物。在具体例中，所述羧化聚氨基酸是羧化聚赖氨酸。在具体例中，所述有机两性试剂是选自四氢嘧啶和/或羟基四氢嘧啶。在具体例中，所述多醣是葡聚醣。

在具体例中，根据本揭示內容的冷冻保存组合物对慢速冷冻保存有用并且包括自约0.1％至约20％v/v(体积/体积)的羧化聚氨基酸以及自约0.1％至约20％w/v(重量/体积)的有机两性试剂。在具体例中，用于慢速冷冻保存的冷冻保存组合物包括自约0.1％至约20％v/v的羧化聚氨基以及自约0.1％至约20％w/v的多醣。在具体例中，用于慢速冷冻保存的冷冻保存组合物包括自约0.1％至约20％v/v的羧化聚氨基酸，自约0.1％至约20％w/v的有机两性试剂，以及自约0.1％至约20％w/v的多醣。在具体例中，本文所述用于慢速冷冻保存的冷冻保存组合物包括自约1％至约10％v/v的羧化聚氨基酸以及自约1％至约10％w/v的有机两性试剂。在具体例中，所述用于慢速冷冻保存的冷冻保存组合物包括自约0.1％至约10％v/v的羧化聚氨基以及自约1％至约10％w/v的多醣。在具体例中，所述用于慢速冷冻保存的冷冻保存组合物包括自约0.1％至约10％v/v的羧化聚氨基酸，自约0.1％至约10％w/v的有机两性试剂，以及自约0.1％至约10％w/v的多醣。在具体例中，所述用于慢速冷冻保存的冷冻保存组合物包括羧化聚氨基酸与有机两性试剂的比率为约1.1:1至约3:1，在具体例中自约1.3:1至约1.7:1，在具体例中约1.5:1。在具体例中，所述用于慢速冷冻保存的冷冻保存组合物包括羧化聚氨基酸与有机两性试剂和多醣的比率为约1.1:1:1至约3:1:1，在具体例中自约1.3:1:1至约1.7:1:1，在具体例中约1.5:1:1。