[发明专利]用于产生间充质干细胞的方法

说明书

本发明通过包括在存在纤连蛋白片段的情况下培养含有间充质干细胞的细胞群的步骤，在短时间内于不含异源组分的培养基中产生大量间充质干细胞。

技术领域

本发明涉及间充质干细胞(MSC)的产生方法，特别是脂肪来源干细胞(ASC或ADSC)的产生方法。本发明还涉及通过该方法获得的间充质干细胞以及含有该细胞作为有效成分的再生医学用组合物。

背景技术

间充质干细胞为源于中胚层组织(间充质)的体干细胞。由于间充质干细胞具有分化成属于间充质的细胞的能力，因此预期其可应用于再生医学，包括骨、血管、心肌等的重建。另外，间充质干细胞可作为胚胎学、分子生物学和药学领域的研究工具。已知MSC可得自各种组织，包括骨髓、脂肪组织、血液、胎盘、脐带和牙髓。由于MSC具有取决于获得MSC的组织的不同性质，因此取决于获得MSC的组织，MSC被称为骨髓来源干细胞、脂肪来源干细胞等。

间充质干细胞常规得自骨髓。然而，在骨髓中只有少量间充质干细胞，并且间充质干细胞的数目随着年龄而减少。因此，从临床应用的观点来看，有必要收集数百毫升的骨髓以获得足够数目的间充质干细胞，这对患者是一个很大的负担。另一方面，间充质干细胞在皮下脂肪中丰富。由于皮下脂肪通过在局部麻醉下抽吸脂肪而易于获得，因此对患者的负担小。近年来，使用脂肪来源干细胞的临床研究正在增加。

用于获得脂肪来源干细胞的一般方法包括使取自人的少量脂肪切片经受酶处理以获得细胞群，通过离心分离从细胞群沉积的基质血管组分(stromal vascularfraction, SVF)，和在含有牛血清的培养基中连续培养该组分以增殖(非专利文献1)。然而，从临床应用的观点来看，使用动物来源组分的牛血清具有很大问题。

引用文献列表

非专利文献

非专利文献1：Tissue Engineering, 2001, 第7卷, 第2期, 第211-218页。

发明内容

发明要解决的问题

本发明解决间充质干细胞的常规产生方法存在的上述问题。本发明的一个目的为提供一种在短时间内产生大量间充质干细胞的方法。

问题的解决方案

本发明的发明人为实现该目的进行了深入研究，结果他们发现，通过在存在纤连蛋白片段的情况下培养含有间充质干细胞的细胞群，在短时间内于无异源物培养基中产生了大量间充质干细胞。因此，本发明得以完成。

本发明的概要包括：

[1] 一种产生间充质干细胞的方法，所述方法包括在存在纤连蛋白片段的情况下培养含有间充质干细胞的细胞群的步骤，

[2] [1]的方法，其中纤连蛋白片段为具有选自细胞粘附结构域和肝素结合结构域的至少一个结构域的片段，

[3] [1]的方法，其中在存在纤连蛋白片段的情况下的培养步骤为培养与包被有纤连蛋白片段的固相接触的细胞群的步骤，

[4] [1]的方法，其中培养步骤为在无异源物培养基中培养细胞群的步骤，

[5] [4]的方法，其中无异源物培养基为无血清培养基或含有同种异体血清的培养基，

[6] [1]的方法，其中细胞群为源于人的细胞群，

[7] [6]的方法，其中细胞群为直接自身体组织分离的细胞群，

[8] [7]的方法，其中身体组织选自脂肪组织、骨髓、血液、胎盘、脐带和牙髓，

[9] [6]的方法，其中细胞群为从胚胎干细胞或诱导的多能干细胞分化或诱导的间充质干细胞，