[发明专利]三酰基甘油的部分酶水解

说明书

本文公开了用包含多核苷酸序列的核酸分子转化的宿主细胞，其中该多核苷酸序列编码水解油中的包含至少一个长链多不饱和脂肪酸的三酰基甘油的酯键的多肽，用于使用这类宿主细胞的方法和用于使用这类宿主细胞产生脂酶的方法。

相关申请的交叉引用

本申请要求2015年12月30日提交的美国临时专利申请号62/272,833的申请日的权益，其公开内容在此通过引用并入本文。

发明领域

本发明涉及用编码脂酶基因的核酸序列转化的宿主细胞和用编码脂酶基因的核酸序列转化的宿主细胞的使用方法。脂酶基因在宿主细胞中表达以赋予水解油中的包含至少一个长链多不饱和脂肪酸的三酰基甘油的酯键的能力。该宿主细胞用于制造足够数量的脂酶以用于商业制造富含长链多不饱和脂肪酸的油组合物。本发明进一步涉及编码脂酶基因的核酸序列。

背景

长链多不饱和脂肪酸(LC-PUFA)如ω-3脂肪酸，对于日常生活和功能是至关重要的。例如，现在很好地确立了ω-3脂肪酸(例如顺式-5,8,11,14,17-二十碳五烯酸(EPA)和顺式-4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯酸(DHA))对降低血清甘油三酯的有益效果。还已知这些化合物的其他心脏保护的益处。事实上，美国心脏协会也已经报道了ω-3脂肪酸可以降低心血管疾病和心脏病风险。LC-PUFA的其他益处是涉及炎症、神经退行性疾病的预防和/或治疗和认知发育的那些益处。富含LC-PUFA例如ω-3脂肪酸的饮食也已经显示出对心脏病、癌症、关节炎、过敏和其他慢性疾病具有有益作用。

LC-PUFA，诸如例如ω-3脂肪酸，通常源自海产油(marine oil)、微生物和/或海藻油。这些来源通常含有三酰基甘油形式的LC-PUFA，其中其他不需要的脂肪酸(如饱和脂肪酸)与所需的LC-PUFA一起存在于三酰基甘油分子中。因此，一般需要纯化和浓缩油中的LC-PUFA。

已知从油(例如海产油、微生物和/或海藻油)产生LC-PUFA浓缩物的多种方法。例如，已经将脂酶用于将来自三酰基甘油的饱和脂肪酸酯交换成乙酯。然后通过蒸馏从混合物中去除饱和脂肪酸，且有时将不饱和酯酯交换回三酰基甘油。其他方法用脂酶从三酰基甘油中选择性地水解饱和脂肪酸，并且通过与尿素形成复合物而去除所得到的游离饱和脂肪酸。通过这些方法获得的油中含有的LC-PUFA的量相对于脂肪酸的量一般为60wt.％或更高，或者70wt.％或更高。

已经发现当在水解反应中使用时，特别是当用于未加工的和精炼的鱼油时，现有的商业化脂酶具有不同程度的有效性，。改善脂酶的选择性和反应速率将会提供更高的油产率和更有效率的处理。例如，一些脂酶会不加选择地从甘油酯水解所有可得的脂肪酸。其他的脂酶会表现出从甘油酯水解脂肪酸的不需要的选择性。将所需的LC-PUFA诸如EPA和DHA留在甘油酯上以在随后的下游处理步骤中效率更高地且有效地浓缩这些LC-PUFA将会是有利的。因此，允许这种选择性和改善的反应速率的脂酶的鉴定和分离将是非常有用的。本发明人已经鉴定出针对所需的LC-PUFA如EPA和DHA具有更好选择性和更高反应速率的脂酶同种型。

发明概述

本文公开了用包含多核苷酸序列的核酸分子转化的宿主细胞，其中该多核苷酸序列编码水解油中的三酰基甘油的酯键的多肽，使用此宿主细胞的方法和用于使用此宿主细胞产生脂酶的方法。