[发明专利]用于制备具有环二核苷酸的病毒颗粒的方法和所述颗粒用于治疗癌症的用途

说明书

本发明涉及用于制备包含免疫原性环二核苷酸的病毒样颗粒的方法以及其用于治疗癌症的用途。

技术领域

本发明涉及医药领域，特别是疫苗和肿瘤学领域。

背景技术

最近已经将环二核苷酸描述为免疫系统的有效细胞质佐剂。它们诱导如针对HIV(人类免疫缺陷病毒)和HSV(单纯疱疹病毒)以及针对癌症的抗病毒先天性免疫反应(WO2005/087238；WO2007/054279；WO2013/185052)。先前在细菌中鉴定了环二核苷酸，并且已知环二核苷酸是免疫刺激性的。

在鉴定到环二核苷酸cGAMP(2'-3'-环GMP-AMP)也存在于脊椎动物中并且是由酶cGAS在识别细胞质DNA后内源合成的之后，该领域最近获得了很多关注。

环GMP-AMP合酶(cGAS)是一种细胞质DNA传感器，其通过催化第二信使cGAMP的合成来进行信号转导。cGAS以序列非特异性方式结合双链DNA，并且这诱导其酶促位点的构象变化，从而允许环GMP-AMP(cGAMP)合成((Wu等人,2012,Science,339,826-830；Sun等人,2012,Science,339,786-791；WO2014/099824；Ablasser等人,2013,Nature,498,380-384)。后生动物cGAMP具有规范的3'-5'和罕见的2'-5'磷酸二酯键二者。cGAMP结合并活化干扰素基因刺激因子(STING)。通过传达来自上游DNA传感器的信号以活化转录因子如IRF3，所述转录因子继而又驱动IFN基因转录，STING在细胞质DNA传感中起重要作用。干扰素(IFN)在针对病毒感染的免疫反应中起关键作用。IFN表达是由被病毒存在的传感器(包括细胞质DNA传感器)活化的信号转导通路诱导的。

然而，环二核苷酸不能有效地穿过细胞的质膜，并且当在没有载体的情况下使用时具有有限的效力。目前的载体主要由基于脂质的复合物如脂质转染胺(lipofectamin)组成，所述基于脂质的复合物由于其毒性而在体内具有有限的用途。

因此，非常需要环二核苷酸、特别是有前景的cGAMP的运载(vectorization)工具。

发明内容

本发明提供了利用带包膜的病毒样颗粒进行的环二核苷酸、特别是cGAMP的新型运载。实际上，环二核苷酸，特别是cGAMP，可以被包装到带包膜的病毒样颗粒(VLP)或病毒粒子中，并诱导先天性免疫反应，特别是干扰素反应。更具体地，为了能够运载环二核苷酸，特别是cGAMP，VLP需要是带包膜的以通过VLP与靶细胞的融合来优化环二核苷酸、特别是cGAMP的递送。具体地，本发明人已显示，施用VLP令人惊讶地改善了cGAMP的作用，特别是其针对肿瘤的作用。在一个优选实施方式中，肿瘤内施用VLP与cGAMP的增加的作用相关。

本发明涉及一种包含脂蛋白包膜的病毒样颗粒，所述脂蛋白包膜包括病毒融合性糖蛋白，其中所述病毒样颗粒含有包装在所述病毒样颗粒中的环二核苷酸，所述病毒样颗粒用于治疗癌症。优选地，病毒样颗粒还包含来自逆转录病毒科的衣壳。

优选地，病毒融合性糖蛋白是来自以下的糖蛋白：逆转录病毒科(包括慢病毒和逆转录病毒)、疱疹病毒科、痘病毒科、嗜肝DNA病毒科、黄病毒科、披膜病毒科、冠状病毒科、丁型肝炎病毒、正粘病毒科、副粘病毒科、丝状病毒科、弹状病毒科、布尼亚病毒科或正痘病毒科(例如天花)，优选正粘病毒、逆转录病毒或弹状病毒。具体地，病毒融合性糖蛋白可以是来自以下的糖蛋白：HIV(人类免疫缺陷病毒)，包括HIV-1和HIV-2；流感，包括A型流感(例如亚型H5N1和H1N1)和B型流感；托高土病毒(thogotovirus)；或VSV(水泡性口腔炎病毒)。

优选地，逆转录病毒衣壳来自逆转录病毒科，优选慢病毒和逆转录病毒。更优选地，逆转录病毒衣壳来自HIV或MLV(鼠白血病病毒)。