[发明专利]用于检测沙门氏菌疫苗菌株的快速方法在审

申请号：	201680085827.4	申请日：	2016-03-16
公开（公告）号：	CN109642247A	公开（公告）日：	2019-04-16
发明（设计）人：	克里斯蒂娜·佩雷斯·希罗纳;帕布鲁·洛萨诺·桑切斯;杰玛·弗莱克斯·普劳斯;塞尔吉奥·马丁内斯·蒙特昆;安娜·帕利亚雷斯·列奥;布鲁诺·特谢拉·迪亚斯;卡蒂娅·尤利亚克·库加特	申请（专利权）人：	艾米克罗齐公司
主分类号：	C12Q1/04	分类号：	C12Q1/04
代理公司：	北京安信方达知识产权代理有限公司 11262	代理人：	李敏春;郑霞
地址：	西班牙***	国省代码：	西班牙;ES
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摘要：
搜索关键词：	检测沙门氏菌沙门氏菌疫苗菌株活疫苗预富集富集细菌
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【权利要求书】：

1.一种检测样品中沙门氏菌(Salmonella)活疫苗菌株的方法，所述方法包括以下步骤：

a)在第一液体预富集介质中孵育所述样品，所述第一预富集介质包含2g/L至6g/L的蛋白胨、0.5g/L至4.5g/L胆盐、0.5g/L至4.5g/L肉提取物、0.5g/L至4.5g/L的第一碘化合物、0.5g/L至4.5g/L的第二碘化合物、0.001g/L至0.008g/L的氨基香豆素抗生素、和0.001g/L至0.008g/L的三芳基甲烷染料，其中所述孵育在约34℃至约40℃持续约5小时至约10小时；

b)在液体富集介质中孵育来自步骤(a)的第一预富集介质的等分试样，所述富集介质包含6g/L至10g/L的蛋白胨、3g/L至7g/L胆盐、2g/L至6g/L肉提取物、2g/L至6g/L的第一碘化合物、2g/L至6g/L的第二碘化合物、0.001g/L至0.008g/L的氨基香豆素抗生素、和0.001g/L至0.008g/L的三芳基甲烷染料，其中所述孵育在约34℃至约45℃持续约14小时至约20小时；以及

c)纯化所述液体富集介质或其等分试样以增加所述沙门氏菌活疫苗菌株的浓度和/或减少污染物；

d)在第二液体预富集介质中孵育来自步骤(c)的富集介质的等分试样，所述第二预富集介质包含2g/L至6g/L的蛋白胨、0.5g/L至4.5g/L胆盐、0.5g/L至4.5g/L肉提取物、0.5g/L至4.5g/L的第一碘化合物、0.5g/L至4.5g/L的第二碘化合物、0.001g/L至0.008g/L的氨基香豆素抗生素、和0.001g/L至0.008g/L的三芳基甲烷染料，其中所述孵育在约34℃至约45℃持续约1小时至约7小时；以及

e)通过分析来自步骤(d)的所述第二液体预富集介质的等分试样检测沙门氏菌活疫苗菌株的存在或不存在。

2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(a)、步骤(b)和/或步骤(d)中的所述蛋白胨是酪蛋白胨。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中步骤(a)、步骤(b)和/或步骤(d)中的所述第一碘化合物是碘。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中步骤(a)、步骤(b)和/或步骤(d)中的所述第二碘化合物是碘化钾。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中步骤(a)、步骤(b)和/或步骤(d)中的所述氨基香豆素抗生素是新生霉素。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中步骤(a)、步骤(b)和/或步骤(d)中的所述三芳基甲烷染料是亮绿。

7.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中步骤(a)中的所述第一预富集介质、来自步骤(c)的所述富集介质和/或步骤(d)中的所述第二预富集介质还包含生长增强剂。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中步骤(b)中的第一预富集介质的所述等分试样是步骤(b)中使用的富集介质的约1/5至约1/500体积。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中步骤(c)的所述液体富集介质或其等分试样使用免疫沉淀程序来纯化。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中检测步骤(e)使用基于传感器的检测方法、基于核酸的检测方法、基于蛋白的检测方法、基于活性的检测方法、或基于生长的检测方法来进行。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述基于传感器的检测方法是电化学检测方法。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述电化学检测方法包括酶生物传感器、DNA传感器、或免疫传感器。