[发明专利]细胞培养

权利要求书

1.一种用于富集和培养循环肿瘤细胞(CTC)或肿瘤相关细胞的细胞培养基质，所述细胞培养基质包括细胞培养表面，其中所述培养表面包括多个微孔，所述微孔的尺寸被设定为在从受试者分离的血液样品中选择CTC或肿瘤相关细胞，其中基于差异增殖，CTC或肿瘤相关细胞优先地从所述血液样品中所含的非肿瘤细胞富集。

2.根据权利要求1所述的基质，其中所述微孔基本上具有类似的尺寸。

3.根据权利要求1或2所述的基质，其中所述微孔包括开口，所述开口呈锥形以提供基本上椭圆形的微孔。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的基质，其中所述基质适于装配在细胞培养容器内。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的基质，其中所述细胞培养容器或基质包括CTC或肿瘤相关细胞。

6.根据权利要求5所述的基质，其中所述CTC可以包括CSC。

7.根据权利要求5或6所述的基质，其中所述CTC可以包括恶性肿瘤细胞。

8.根据权利要求5至7中任一项所述的基质，其中所述肿瘤细胞源自于癌。

9.根据权利要求8所述的基质，其中所述癌可以选自由以下各项组成的组：乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、宫颈癌、头颈部癌、肺癌、结肠癌、直肠癌、胰腺癌、胃癌、肾癌或肝癌。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的基质，其中所述肿瘤相关细胞是肿瘤相关巨噬细胞、自然杀伤细胞、循环内皮干细胞或祖细胞。

11.一种用于培养CTC的体外方法，所述方法包括：

i)提供来自受试者的分离的血液样品；

ii)将所述样品中的有核细胞与无核细胞分开以提供富集的有核级分；

iii)将所述富集的有核级分与根据权利要求1至10中任一项所述的基质或细胞培养容器组合；以及

iv)提供细胞培养条件，所述细胞培养条件基于增殖能力选择CTC或肿瘤相关细胞。

12.根据权利要求11所述的方法，其中在缺氧条件下培养所述细胞。

13.根据权利要求12所述的方法，其中在低于5％O₂的缺氧条件下，优选地约5％CO₂和1％O₂，培养所述细胞。

14.根据权利要求11至13中任一项所述的方法，其中将所述细胞在缺氧条件下培养至少14天。

15.根据权利要求11至14中任一项所述的方法，其中所述细胞是从患者分离的乳腺癌细胞并且在缺氧条件下培养至少14天以获得表达一种或多种细胞角蛋白的高水平的CTC。

16.一种筛选试剂的方法，其中所述试剂影响循环肿瘤细胞或与肿瘤相关的细胞的增殖、分化或功能，所述方法包括以下步骤：

i)提供根据权利要求1至10中任一项所述的包括CTC或肿瘤相关细胞的细胞培养基质或容器；

ii)添加待测试的至少一种试剂；以及

iii)监测所述试剂对所述CTC或肿瘤相关细胞的增殖、分化或功能的活性。