[发明专利]一种缩宫素脱酰胺杂质的制备方法

说明书

本发明公开了一种缩宫素脱酰胺杂质的制备方法。该制备方法包括下述步骤：采用高效液相反相色谱法将缩宫素脱酰胺杂质前体粗品溶液依次进行反相环化、反相纯化、反相脱盐，即可；高效液相反相色谱法的填料为硅胶C18；所述的缩宫素脱酰胺杂质前体粗品为含两游离巯基的缩宫素脱酰胺杂质前体粗品。本发明创新性运用了反相吸附法环化、纯化和脱盐，一次性解决环化、纯化和脱盐的问题，优化了生产工艺，适合工业化连续生产。

技术领域

本发明涉及生物制药领域。更具体地，本发明涉及一种缩宫素脱酰胺杂质的制备方法。

背景技术

缩宫素，又称催产素，英文名为Oxytocin，结构式：

分子式为：C₄₃H₆₆N₁₂O₁₂S₂，分子量为1007.2

缩宫素用于引产、催产、产后及流产后因宫缩无力或缩腹不良而引起的子宫出血；了解胎盘储备功能(催产素激怒试验)；滴鼻可促使排乳。缩宫素能间接刺激子宫平滑肌收缩，模拟正常分娩的子宫收缩作用，导致子宫颈扩张，子宫对缩宫素的反应在妊娠过程中逐渐增加，足月时达高峰。缩宫素也可刺激乳腺的平滑肌收缩，有助于乳汁自乳房排出，但并不增加乳腺的乳汁分泌量。

就一个药品而言，其中所含的少量杂质是引发药品副作用最重要的原因，因此对其纯度的检查是保证药品安全有效性的重要基础之一，而纯度检查的内容，根据各个药物的性质和特点有些不同，但基本上均要涉及各自的“有关物质”检查研究。合成多肽的有关物质主要来自合成过程中的工艺杂质和由于多肽不稳定而产生的降解产物、聚合物等杂质，尽管目前合成多肽的纯化工艺已经有了很大进步，但工艺杂质仍是合成多肽有关物质的重要来源，这主要是由于合成多肽的一些工艺杂质(如缺失肽、断裂肽、氧化肽、二硫键交换的产物等)与药物本身的性质可能非常近似，从而给纯化造成了一定的难度。研究表明合成多肽中最常见的降解产物是脱酰胺产物、氧化产物、水解产物。在组成多肽的各种氨基酸中，天冬酰胺、谷胺酰胺和肽链C段酰胺易于发生脱酰胺反应(尤其是在pH值升高和高温条件下)。

由于合成多肽中有些杂质的性质与目标产品非常接近，因此建立适宜的方法充分检出这些杂质是合成多肽药物有关物质研究中面临的巨大困难。

目前国内缩宫素脱酰胺杂质大多先是采用固相合成保护缩宫素树脂，再经过裂解干燥得缩宫素脱酰胺杂质前体粗品(Cys-Tyr-Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly的三氟乙酸盐)，高度稀释环化，纯化，转盐等步骤，最终得到缩宫素脱酰胺杂质。高度稀释环化由于样品浓度稀，体积庞大，对于后期纯化很不利。现在还缺乏一种有效的制备含二硫键的多肽原料药类似物的方法，因此仍然迫切需要开发新的含二硫键多肽的制备方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于为了克服现有技术中缩宫素脱酰胺杂质的制备工艺复杂、收率低、样品浓度稀、体积庞大的缺陷，而提供了一种缩宫素脱酰胺杂质的制备方法。本发明的缩宫素脱酰胺杂质的制备方法以含一对游离巯基(-SH)的多肽粗品——缩宫素脱酰胺杂质前体粗品为起始原料，经过高压液相反相色谱环化、纯化和脱盐步骤，制备高纯度的缩宫素脱酰胺杂质的方法。本发明的多肽是缩宫素制备过程中的1个关键杂质，因此可作为缩宫素检测过程的标准对照品，对缩宫素以及杂质进行定性和定量分析，对于提高缩宫素的质量标准，控制产品质量具有重要意义。

本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题的：

本发明提供了一种缩宫素脱酰胺杂质的制备方法，其包括下述步骤：采用高效液相反相色谱法将缩宫素脱酰胺杂质前体粗品溶液依次进行反相环化、反相纯化、反相脱盐，即可；高效液相反相色谱法的填料为硅胶C18；

所述的缩宫素脱酰胺杂质前体粗品为含两游离巯基的缩宫素脱酰胺杂质前体粗品；

所述的缩宫素脱酰胺杂质为