[发明专利]一种α-2;3羟乙酰唾液酸乳果糖的制备方法

说明书

本发明公开了一种α‑2,3羟乙酰唾液酸乳果糖的制备方法，其特征在于：N‑羟乙酰甘露糖(即ManNGc)60～150重量份，丙酮酸钠120～200重量份，乳果糖60～100重量份，三磷酸胞苷钠(CTP)150～250重量份，溶于4000～8000重量份超纯水中，用4摩尔/升的NaOH调pH8.5，加入500～1000重量份1摩尔/升的pH8.5的Tris‑HCl；加入50～100重量份2摩尔/升的MgCl₂；加入1～1.5重量份醛缩酶(Pm‑aldolase)，2.6～3.5重量份的CMP‑唾液酸转移酶(NmCSS)；3～4重量份的α‑2,3唾液酸苷转移酶(PmST₁)。然后将混合物放入37℃气浴振荡器中，反应10～18小时。往反应液中加等体积95％乙醇，放入4℃冰箱中静置30min，然后在7000转/分下离心30min，上清液采用旋转蒸发浓缩。并冷冻干燥即为纯品。

技术领域

本发明属于功能性寡糖制备技术领域，具体涉及一种α-2,3羟乙酰唾液酸乳果糖制备方法。

背景技术

唾液酸寡糖在生物学及临床医学等方面都有广泛的应用。在糖蛋白分子中，唾液酸寡糖常常聚集在肽链的一个区段，对大分子构象以及物理性质都有明显的影响。另外，唾液酸寡糖也是动物细胞表面负电荷的主要来源，它的存在有利于细胞与带正电的物质的结合，参与调节渗透压、细胞内外物质运输等过程。唾液酸寡糖在医疗领域作为抗菌剂的开发潜力是非常大的。另外,唾液酸寡糖与肿瘤的产生和转移有密切的关联。人们越来越认识到唾液酸寡糖在人体生命活动中起到的重要作用，不断有人开始从事唾液酸寡糖的研究与开发，因此，唾液酸化寡糖的合成以及相关的生物活性研究在化学和生物学界形成了一个热点。

羟乙酰唾液酸是唾液酸中的一种，目前，羟乙酰唾液酸寡糖研究较少，在市场上主要用于治疗神经性疾病和老年痴呆症，也可用作婴儿食品配料和营养增补剂等。但是目前国内的羟乙酰唾液酸寡糖主要依靠进口，国内还没有出现大规模的生产厂家。由于起步较晚，没有掌握生产羟乙酸唾液酸寡糖的核心技术，而且国内生产的唾液酸在质量和价格上也与进口的产品有一定的差距。本发明以乳果糖为母体进行α-2,3羟乙酰唾液酸糖苷化，得到的新型α-2,3羟乙酰唾液酸乳果糖是很有潜力的活性寡糖，对它们的功能性研究具有非常重要的科学和民生意义。正是根据市场的需求，经过不断实验和探索，我们发明了一种α-2,3唾液酸化乳果糖制备方法。

发明内容

本发明目的是克服了用化学方法对乳果糖进行羟乙酰唾液酸糖基化比较困难的问题。这是因为唾液酸糖苷化反应条件较一般糖苷化反应苛刻，立体选择性通常较差，端基碳的立体构型较难控制，唾液酸糖苷化反应产率差，很难制备。利用最近发展的酶法对乳果糖进行羟乙酰唾液酸糖基化修饰，利用高效的酶法合成制备技术，能够成功的制备出一种α-2,3羟乙酰唾液酸乳果糖。

本发明的技术方案是：