[发明专利]石油降解菌Oil 2-3、石油降解菌Oil 2-3分离纯化方法及其应用

说明书

本发明提供一种石油降解菌Oil 2‑3，其分类命名为耐碱海旋菌Thalassospira alkalitolerans，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCC No.13079。本发明还提供石油降解菌Oil 2‑3的分离纯化方法、石油降解菌Oil 2‑3在石油降解中的应用及应用方法。本发明从受石油污染的海水水样中筛选到石油降解菌Oil 2‑3菌株，通过遗传学分类鉴定确定为耐碱海旋菌；通过对石油降解及对其环境耐受性试验，该菌株对石油降解率大于84.6％，该菌株pH耐受范围为pH值4‑11，适合在海上溢油环境生存，可利用并降解海水中石油，实现海上溢油的微生物降解。

技术领域

本发明涉及环境修复技术领域，特别涉及一种适合于海洋环境的石油降解菌Oil2-3、石油降解菌Oil 2-3分离纯化方法及其应用。

背景技术

随着全球经济一体化进程的加快，海上交通运输业的发展和海洋油气资源的进一步勘探开发，海上溢油事故也不断地增多。海上溢油污染是各种海洋污染类型中发生频率最高、分布面积最广、危害程度最大的一种。目前，海上溢油应急处理方法有物理法如围油栏围控、吸油毡吸附等，化学法如喷洒化学分散剂等。然而，物理法对于海况要求较高且只能回收总溢油量的10-15％；而化学分散剂虽然可在一定程度上将海面的溢油分散成极微小的颗粒，但不能实现溢油真正的消除，另外化学分散剂存在二次污染，会给海洋带来新的污染。因此，亟待研制新型海上溢油应急处理方法。

微生物降解已被证明是一种非常有效的石油污染清除技术，其具有无污染、成本低、效果好等优点，较适合海上溢油应急处理的实际应用，因此，有必要筛选出高效降解石油的菌株来进行海上溢油应急处理的应用。

发明内容

鉴于上述状况，有必要提供一种生长快速、培养简单、环境耐受性强、降解效率高、适用于海洋环境的石油降解菌，以应用于海上溢油应急处理。

本发明提供一种石油降解菌Oil 2-3，其分类命名为耐碱海旋菌Thalassospiraalkalitolerans，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为：CGMCC No.13079。

进一步地，所述石油降解菌Oil 2-3的菌落呈奶油白色，表面光滑湿润，边缘规则。

进一步地，所述石油降解菌Oil 2-3的pH耐受范围为pH值4-11。

本发明还提供一种石油降解菌Oil 2-3的分离纯化方法，所述分离纯化方法为：取3mL受石油污染的海水水样接种至已经灭菌的100mL富集培养液中，并加入石油0.5mL，28℃、180rpm振荡培养7天，培养结束后挑选液体混浊、石油层消失的培养液，进行新一轮富集，重复5轮富集，每轮富集培养液中加入的石油量比上一轮多0.5mL，完成石油降解菌的富集驯化；将经过富集驯化的培养液在石油平板上进行划线分离，25℃培养1天，石油平板上长出清晰的菌落，挑选生长良好且噬油圈清晰的菌落，再次在石油平板上进行划线分离，反复多次划线分离，直至分离筛选出生长良好、菌落单一的菌株。

进一步地，所述富集驯化培养基配方为：氯化铵1.2g，磷酸氢二钾0.2g，柠檬酸铁12mg，酵母粉0.2，海水1L，pH 7.6-8.0。

进一步地，所述石油平板培养基配方为：氯化铵1.2g，磷酸氢二钾0.2g，柠檬酸铁12mg，酵母粉0.2g，琼脂20g，海水1L，pH 7.6-8.0，在划线分离前在平板表面均匀涂覆200μL已灭菌石油。

本发明还提供一种石油降解菌Oil 2-3在石油降解中的应用，所述石油降解菌Oil2-3对石油降解率大于84.6％。