[发明专利]一种生产胞苷的重组微生物及生产胞苷的方法有效
| 申请号： | 201710003833.7 | 申请日： | 2017-01-04 |
| 公开（公告）号： | CN106754602B | 公开（公告）日： | 2021-08-20 |
| 发明（设计）人： | 刘爱霞;胡志浩;范俊英;江君君;田锋;王欣彤 | 申请（专利权）人： | 苏州华赛生物工程技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12P19/38;C12R1/19;C12R1/125;C12R1/15;C12R1/225 |
| 代理公司： | 北京精金石知识产权代理有限公司 11470 | 代理人： | 尉月丽 |
| 地址： | 215600 江苏省*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 生产 重组 微生物 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种使用重组微生物生产胞苷的方法，其特征在于：包括步骤为：
（1）在重组微生物内去除利用和降解胞苷的酶的编码基因使胞苷不再参与细胞中的代谢，所述的利用和降解胞苷的酶为胞苷/尿苷激酶Udk、胞苷脱氨酶Cdd、核糖核苷水解酶RihA和RihC、和核苷转运蛋白NupC；
（2）从CMP的去磷酸化来合成胞苷，在重组微生物内表达或超量表达对CMP有特异性的核苷酶，所述的核苷酶为酿酒酵母来源的PHM8；
（3）增强细胞中CMP的供给，在重组微生物内去除CMP激酶Cmk，表达或超量表达CTP和CDP磷酸化酶或相应的核苷酸酶，所述的CTP和CDP磷酸化酶或相应的核苷酸酶为大肠杆菌来源的NudG；
（4）对重组微生物的嘧啶合成途径的阻遏蛋白编码基因进行敲除和/或解除嘧啶合成途径终产物的反馈抑制，通过以下方法：
1）敲除氨甲酰磷酸合成酶的编码基因的转录抑制阻遏蛋白的编码基因，所述氨甲酰磷酸合成酶的编码基因的转录抑制阻遏蛋白的编码基因为PurR；
（5）过表达乳清酸核糖磷酸转移酶，所述的乳清酸核糖磷酸转移酶为大肠杆菌来源的PyrE；
（6）过表达大肠杆菌来源的尿苷-5'-单磷酸激酶PyrH的突变体D93A或对CMP有特异性的磷酸化酶，所述的磷酸化酶为大肠杆菌来源的酸性磷酸化酶AphA；
所述的重组微生物为大肠杆菌。
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