[发明专利]经修饰的CCP抗原及其用途和抗CCP抗体检测试剂盒及其制造方法

说明书

本发明属于体外诊断技术领域，具体涉及一种经修饰的CCP抗原，所述CCP抗原具有下式I所示的序列：其中，式I中的谷氨酸E的羧羟基被R基团取代，所述R基团选自：C_1‑10烷基氧基，C_1‑10烷基‑CO‑NH‑基和C_1‑10烷基‑CO‑NH‑NH‑基；所述C_1‑10烷基任选被一个或多个选自C_1‑4烷基，C_1‑4烷基氧基，羟基，氨基，硝基和苯基的取代基取代。本发明还涉及该抗原用于检测抗CCP抗体的用途，包括该抗原的抗CCP抗体检测试剂盒及其制造方法。本发明的优势包括经修饰的CCP抗原连接蛋白载体后的衍生物的抗原活性更高；抗CCP抗体检测的精密度更高；抗CCP抗体检测的准确度更高。

技术领域

本发明属于体外诊断技术领域，具体涉及一种经修饰的CCP抗原，该抗原用于检测抗CCP抗体的用途，包括该抗原的抗CCP抗体检测试剂盒及其制造方法。

背景技术

类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis，RA)是一种累及周围关节为主的多系统、炎症性、自身免疫性、致畸性疾病。该病在欧美国家的发病率为1％，我国为0.32％～0.36％。该病在起病2年内即可出现不可逆的骨关节破坏，是造成人群劳动力丧失的主要原因之一。

郭大文等研究发现抗环瓜氨酸肽抗体对类风湿性关节炎的发病具有预测价值(郭大文，王晔，高红华，等.抗环瓜氨酸肽抗体对类风湿性关节炎发病的预测价值[J].中国实验诊断学，2005，9(1)：13-14)。

抗环瓜氨酸肽(Cyclic Citrullinated Peptide，CCP)抗体是以IgG型为主的抗体。抗CCP抗体是由RA患者的B淋巴细胞自发分泌的，而其他疾病患者和正常人群B淋巴细胞并不自发分泌抗CCP抗体。因此，抗CCP抗体对RA具有较高的特异性。抗CCP抗体的检测现多采用固相合成法来人工合成含瓜氨酸的肽段。最初使用含19个氨基酸的直链线性瓜氨酸肽段，其氨基酸序列为：SHQESTXGRSRGRSGRSGS。然而研究发现用直链线性瓜氨酸肽段为底物，用ELISA法来检测抗环瓜氨酸肽抗体常会导致失败，原因是由于此肽段不能吸附于聚苯乙烯上。后来，为了提高瓜氨酸肽链的抗原活性，克服直链线性瓜氨酸肽段的不足，荷兰学者Schellekens GA(Schellekens GA，Visser H，de Jong BA，van den Hoogen FH，Hazes JM，Breedveld FC et al.The diagnostic properties of rheumatoid arthritisantibodies recognizing a cyclic citrullinated peptide.Arthritis Rheum 2000；43：155-163)将上述由19个氨基酸残基组成的一条瓜氨酸肽链中的两个丝氨酸替换成半胱氨酸，并使半胱氨酸环化形成β-转角结构相似的二硫键，而成为环瓜氨酸肽。

Anti-CCP抗体的检测对RA的诊断具有高度的特异性(特异性在90％以上)，并可用于RA的早期诊断。大约70％的RA患者在发病早期，血清中即可出现Anti-CCP抗体，而且抗体阳性的患者比抗体阴性的患者易发展成为可通过放射性方法检测到的骨关节损害。TiercyJM(Rheumatology，2002，41(7)：809)研究Anti-CCP抗体、AKA和IgM-RF在区别RA与其他风湿性疾病中的意义时发现：IgM-RF对RA诊断的敏感性高(75％)，其次是Anti-CCP抗体(68％)；而Anti-CCP抗体对RA诊断的特异性最高(96％)，其次为AKA(94％)；而IgM-RF对RA诊断的特异性仅74％。所以，在诊断RA时，Anti-CCP抗体比IgM-RF具有更高的特异性。

目前的Anti-CCP诊断技术主要包括酶联免疫试验(ELISA)、化学发光(CLIA)、免疫层析法(胶体金或乳胶颗粒法)、时间分辨免疫荧光分析法(TRFIA)、免疫斑点试验，这些方法都有各自的优势和缺点。