[发明专利]一种用于抗生素检测的磁控适配体传感器制备方法

权利要求书

1.一种用于抗生素残留检测的MCNCs/PMAA磁控拉曼适配体传感器制备方法，其特征在于，该方法包括如下具体步骤：

1)MCNCs/PMAA磁性纳米微球制备：利用溶剂热法合成MCNCs，首先，称取1.350g FeCl₃·6H₂O，3.854g醋酸钠，0.400g柠檬酸钠溶解在装有70mL乙二醇的250mL三口圆底烧瓶中，随后，上述溶液在氩气保护下加热到300℃，并持续反应1h，形成均匀的黑红色溶液；待溶液冷却至室温，将其转移到至100mL聚四氟乙烯内衬不锈钢反应釜中，在200℃下密封、加热反应17小时；最后，通过磁分离收集的方法，以乙醇和超纯水清洗多次，最后分散至10mL乙醇中，得到黑色MCNCs纳米微球待用；随后在MCNCs表面修饰PMAA壳，修饰之前，首先在其表面修饰改性聚苯乙烯MPS，具体操作步骤为，将40mL乙醇、10mL超纯水、1.5mL氨水及0.3g MPS添加至上述10mL MCNCs乙醇溶液中，并在60℃水浴环境下磁力震荡反应24h；最后，利用蒸馏沉淀聚合法以甲基丙烯酸AA、甲叉双丙烯酰胺MBA作为交联剂，偶氮二异丁腈AIBN为引发剂，在乙腈溶剂中制备MCNCs/PMAA磁性纳米微球；

2)MCNCs/PMAA-适配体捕捉探针制备：具有羧基表面的MCNCs/PMAA磁性纳米微球和具有氨基表面的核酸适配体利用缩合反应制备得到MCNCs/PMAA-适配体螯合物；具体操作步骤为：取1mL羧基化的MCNCs/PMAA分散至2mL EDC水溶液中，随后，将含有1mL 1μM核酸适配体的PBS溶液加入至上述溶液中混合反应12h，最终得到MCNCs/PMAA-适配体捕捉探针；

3)增强基底APS制备：将制备的金纳米颗粒与对巯基苯胺PATP乙醇溶液室温下反应约4h，得到Au/PATP；随后，将APTMS逐滴加入混合溶液中，反应15min后，将5mL硅酸钠加入溶液中，在90℃水浴环境下反应30min，得到增强基底待用；

4)信号分子cDNA-APS制备：搅拌15分钟后，将增强基底进行离心分离，弃上层液体，获得的沉淀用乙醇和乙腈分别清洗三次，在60℃下干燥1h，随后与溶解在乙腈溶剂中的三聚氯氰连续搅拌反应4h；此后，将产物进行离心，弃上层液体，获得的沉淀用乙腈、超纯水、硼酸盐缓冲液BBS分别清洗3次；最终产物再分散在BBS溶液中，将0.4mL cDNA BBS溶液加入其中，室温下轻微震动连续反应过夜；

5)基于拉曼光谱的四环素残留检测：首先，将制备的MCNCs/PMAA-aptamer捕捉探针与cDNA-APS信号分子混合，37℃下连续震荡反应2h；随后,分别取200μL MCNCs/PMAA-aptamer/cDNA-APS生物螯合物分装至一系列平行离心管中，随后，将100μL不同浓度的待检物抗生素原液依次加入到上述离心管中，混合溶液37℃条件下连续震荡反应70min；以加有100μL超纯水的离心管作为对照组；反应结束后，利用磁铁进行MCNCs/PMAA-aptamer-抗生素磁性富集，同时利用拉曼光谱在150cm^-1-2000cm^-1波长范围内对含有不同浓度信号分子的上清液拉曼强度进行测定。

2.根据权利要求1所述的一种用于抗生素残留检测的MCNCs/PMAA磁控拉曼适配体传感器制备方法，其特征在于，所述的MCNCs/PMAA纳米微球，由蒸馏沉淀聚合反应制备而成，具有高饱和磁化强度71.5emu/g及优良的生物相容性，有利于快速、较易的生物反应及磁性分离；此外，该纳米微球具有自由的羧基表面，使其尽可能多的与核酸适配体发生缩合反应生成捕捉探针。

3.根据权利要求1所述的一种用于抗生素残留检测的MCNCs/PMAA磁控拉曼适配体传感器制备方法，其特征在于，所述的抗生素为四环素，核酸适配体序列为：5’-NH₂-CGT ACGGAA TTC GCT AGC CCC CCG GCA GGC CAC GGC TTG GGT TGG TCC CAC TGC GCG TGG ATCCGA GCT CCA CGT G-NH₂-3’，核酸适配体短链互补DNA为：5’-NH₂-CAA CGT GCT AGC GAA-3’。