[发明专利]一种猪链球菌2型弱毒株及其应用

说明书

技术领域

本发明属于疫苗制备技术领域，具体为一种猪链球菌2型弱毒株及其应用。

背景技术

猪链球菌病是由多种溶血性链球菌引起的猪的一种多型性传染病，该病的临床特征是急性者表现为出血性败血症和脑炎，慢性者则表现为关节炎，心内膜炎和淋巴结脓肿。该病通常的致病菌为猪链球菌。该菌血清型有33个之多，目前已知猪链球菌2型为高毒力血清型，可引起猪发病死亡，可致人畜共患，给养猪业造成了严重的经济损失。国内预防猪链球菌病多使用单价或多价灭活疫苗，取得一定成果。上个世纪70年代以来，商品化的C群链球菌弱毒疫苗广泛应用，对马链球菌兽疫亚种引起的猪链球菌病起到很好的预防作用，大量临床试验证据表明细菌性活疫苗对控制细菌病起到积极作用，具有早期预防，诱导黏膜免疫、细胞免疫等特点。因此，目前开发针对流行血清型猪链球菌2型的活疫苗具有积极的意义，对临床上常年不断发生的猪链球菌病的预防具有明显优势。

目前我国针对猪链球菌2型的弱毒疫苗的研究多以基因工程构建为主，以猪链球菌2型菌株为亲本菌株，构建单缺失/双缺失等菌株，在一定程度上降低了猪链球菌菌的毒力，但是缺失菌株容易存在回复突变的可能，易造成菌株的毒力返强。自然弱毒株是在自然界中存在的，非人为改造的菌株，比目前以基因工程手段构建的缺失弱毒菌株更加稳定，不易产生毒力返强。本发明提供中所描述的猪链球菌是从健康猪中分离的自然弱毒株，毒力非常低，对仔猪不存在毒力，同时能刺激机体产生针对猪链球菌2型产生抗体，既安全，又有效。

发明内容

本发明的目的是在于提供了一种猪链球菌2型弱毒株，所述菌株已于2017年1月4日送至中国典型培养物保藏中心保藏，分类命名：猪链球菌2型(Streptococcus suis)XN，保藏编号：CCTCC NO：M2017003，地址：中国武汉武汉大学。

本发明的另一个目的在于提供了一种猪链球菌2型XN的应用，该菌株为猪链球菌2型的自然弱毒株，利用该菌株可用于制备猪链球菌2型疫苗，制得的疫苗无致病性、免疫原性好、刺激抗体迅速。

为了实现上述的目的，本发明采用以下技术方案：

猪链球菌2型XN(SS2-XN株)的分离、筛选和鉴定：

申请人从2009年11月自湖北省咸宁某屠宰场屠宰猪的肺组织，经各项鉴定证明为猪链球菌2型，所述菌株已于2017年1月4日送至中国典型培养物保藏中心保藏，分类命名：猪链球菌2型(Streptococcus suis)XN，保藏编号：CCTCC NO：M2017003，地址：中国武汉武汉大学。

猪链球菌2型XN(SS2-XN株)的生物学特性鉴定如下：

猪链球菌2型XN为链球菌属，大小0.1mm-1.0mm、灰白色、半透明、表面光滑、圆形、边缘整齐，在绵羊鲜血琼脂平板上形成的菌落周围可见β溶血环。新鲜培养物玻片固定后进行定革兰氏染色，镜检结果为革兰氏阳性，个体呈圆球状或卵圆形，与猪链球菌2型LT菌株(CCTCC NO：M2011282)的革兰氏结果比较，多以短链或长链排列(图1)。

猪链球菌2型在LB琼脂平皿上生长较差，37℃温箱培养20小时以上可见针尖大小菌落。在TSA平皿(含5％新生牛血清)上生长良好，37℃温箱培养12小时即见针尖大小菌落。

一种猪链球菌2型XN的应用，包括利用该链球菌制备成治疗或预防猪链球菌病2型的疫苗，或者与其他有效成分制备成联合疫苗。

优选的，上述应用中，所述疫苗的保护剂为明胶蔗糖保护剂，即疫苗中明胶的终含量为1.5％(g/ml)，蔗糖终含量为5％(g/ml)，疫苗的稀释液为20％(g/ml)氢氧化铝胶生理盐水。

与现有技术相比，本发明具有以下优点：

1.本疫苗所用菌株对猪体无致病性，能较快的刺激机体产生针对同血清型的抗体。

2.本疫苗可以预防猪链球菌2型引起的疾病，对于同血清型的免疫保护效果达到90％以上，不会对机体产生应激反应，可应用于猪场中种猪和仔猪对猪链球菌病的预防，降低猪场猪链球菌病的发病率，提高仔猪存活率。

附图说明

图1：猪链球菌2型LT株和猪链球菌2型XN革兰氏染色对比图。

图1中A：猪链球菌2型LT菌株革兰氏染色；图1中B：猪链球菌2型XN革兰氏染色。

图2：一种猪链球菌通用引物扩增的PCR示意图；

其中泳道M：DNA分子Marker；泳道1：阴性对照(H₂O)，泳道2～5：猪链球菌分离菌株；泳道6：猪链球菌2型XN菌株。