[发明专利]一种高产褐藻胶裂解酶的海洋弧菌及其应用

说明书

本发明提供一株高产褐藻胶裂解酶的海洋灿烂弧菌(Vibiro splendidus)OU02株，其保藏编号为CGMCC No.13478。本发明所筛选的灿烂弧菌(Vibiro splendidus)OU02株用于生产制备褐藻胶裂解酶。本发明所筛选的灿烂弧菌OU02株所产生的褐藻胶裂解酶可以降解褐藻胶产生具有潜在生物学活性的褐藻寡糖，该微生物发酵周期短，酶活性高，且多数活性为胞内酶活，有利于样品的收集及保存，为后续的工业化应用奠定了基础。

技术领域

本发明属于有益微生物筛选技术领域，具体涉及一种高产褐藻胶裂解酶的海洋弧菌及其应用

背景技术

褐藻胶是由α-L-古洛糖醛酸(G)和β-D-甘露糖醛酸(M)通过1,4-糖苷键，按照不同的组合方式构成的非均聚线性分子。褐藻胶裂解酶通过β-消除反应，催化单体间的1,4-糖苷键，在非还原端的C4、C5之间形成不饱和双键，该双键在235nm处有最大吸光值。在酶活测定中，主要通过OD₂₃₅紫外吸收法检测不饱和双键的产生和薄层层析法(TLC)测定降解产物的均一性。

目前褐藻胶裂解酶，尤其是内切型褐藻胶裂解酶，已经被广泛应用于生产褐藻胶寡聚糖、研究褐藻胶的精细结构以及制备红藻和褐藻的原生质体。此外，褐藻胶裂解酶通过降解细菌生物膜上的多糖，在治疗囊性纤维化方面有巨大的潜在应用价值。褐藻胶裂解酶还可应用于褐藻胶发酵生产生物乙醇，但目前所使用的褐藻胶裂解酶存在着产物均一性差的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一株高产褐藻胶裂解酶的菌株，其降解褐藻胶的产物均一性高，从而推动褐藻胶寡糖的制备及应用，以弥补现有技术的不足。

本发明的第一个目的在于提供一株高产褐藻胶裂解酶的海洋灿烂弧菌(Vibriosplendidus)OU02株，该微生物保存在位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.13478，保藏日期为2016年12月22日。

本发明所筛选的灿烂弧菌(Vibiro splendidus)OU02株用于生产制备褐藻胶裂解酶；

本发明还提供了一种用于诱导上述海洋弧菌表达产生褐藻胶裂解酶的培养基，培养基的基本碳源为褐藻胶；

作为实施例的一种具体记载，一种培养基的具体配比如下：褐藻胶2g/L，酵母粉0.5g/L，蛋白胨2.5g/L，海水溶解并调节pH 7.6-7.8。

本发明再一个方面提供一种制备褐藻胶裂解酶的方法。

本发明所筛选的灿烂弧菌OU02株还用来发酵生产褐藻寡糖。

本发明所筛选的灿烂弧菌OU02株所产生的褐藻胶裂解酶可以降解褐藻胶产生具有潜在生物学活性的褐藻寡糖，该微生物发酵周期短，酶活性高，且多数活性为胞内酶活，有利于样品的收集及保存，为后续的工业化应用奠定了基础。

附图说明

图1：TLC检测细胞裂解物酶活测定图，其中1.未加胞内酶对照样品；2.加酶样品；3.未加膜上提取酶对照；4.加酶；

图2：本发明筛选的菌株的生长曲线图。

具体实施方式

本发明从具有产生高活性褐藻胶裂解酶的海洋无脊椎动物的消化腺来源的共生微生物中进行筛选，获得了一株能够产生专一性的褐藻胶裂解酶的微生物菌株，从而促成了本发明。

下面结合实施例对本发明进行详细的描述

实施例1：微生物的筛选及鉴定

1、微生物的筛选