[发明专利]用于谷胱甘肽测定的双芳基并咪唑类荧光探针的合成方法

权利要求书

1.一种用于谷胱甘肽测定的双芳基并咪唑类荧光探针的合成方法，其特征在于以相邻二胺和间双醛为原料，以蜜胺甲醛树脂负载硫酸为催化剂，微波辅助通过缩合反应制备，步骤如下：

1)将浓度为37wt％的甲醛溶液与乌洛托品混合，搅拌下加入三聚氰胺，甲醛溶液、乌洛托品与三聚氰胺的质量比为1:0.013:3.5，升温到80℃反应0.5-1小时，利用三乙醇胺调节pH至8.5，冰水浴冷却，得到无色透明的树脂粘稠液；将上述树脂粘稠液溶解到丙酮中，树脂粘稠液与丙酮的质量比为1:50-60，搅拌下缓慢加入浓度为98wt％的硫酸，树脂粘稠液与硫酸的质量比为1:7-8，加完后继续反应30min，静置，将固体抽滤，乙醚洗涤3次，60℃干燥，得到蜜胺甲醛树脂负载硫酸催化剂；

2)将邻苯二胺或邻萘二胺与取代4-羟基-1,3-苯二醛混合，取代4-羟基-1,3-苯二醛的结构式为：

邻苯二胺或邻萘二胺与取代4-羟基-1,3-苯二醛的质量比为2:1，然后按20mol％的量加入蜜胺甲醛树脂负载硫酸催化剂，经研磨混合均匀后放入微波仪中，800W功率下，微波辐射15-20min，TLC跟踪反应进程；反应结束后，冷却至室温，搅拌下加入乙醇，乙醇与蜜胺甲醛树脂负载硫酸催化剂的质量比为20：1，静置0.5-1h析出树脂沉淀，抽滤；滤液经减压浓缩后硅胶色谱柱分离，得到目标化合物，其结构为式(Ⅲ)或(Ⅳ)，

2.一种由权利要求1所述的合成方法所合成的2,4-双芳基并咪唑基苯酚类荧光化合物的应用，其特征在于用于生理环境下谷胱甘肽巯基活性分子的检测，方法如下：

1)利用双芳基并咪唑官能团捕获体系中二价铜离子形成铜配合物，使得探针的荧光强度显著淬灭，其结构为式(Ⅰ)或(Ⅱ)：

分别取化合物(Ⅰ)或(Ⅱ)溶于二甲基亚砜中至浓度为3μmol·L^-1，向96孔板中分别加入500nmol·L^-1到500μmol·L^-1硫酸铜溶液，振荡器充分混匀，反应30min后在酶标仪上测定荧光强度，然后根据数据绘出荧光强度对应铜离子浓度工作图；

2)利用氧化型或还原型谷胱甘肽与二价铜离子更强的配位效应，在该铜配合物荧光体系中加入谷胱甘肽类巯基活性分子，使得2,4-双芳基并咪唑基苯酚与铜离子的配位分解而游离发光团的荧光性能恢复，其结构为式(Ⅲ)或(Ⅳ)：

3)在上述浓度为3μmol·L^-1的化合物(Ⅰ)或(Ⅱ)与500nmol·L^-1到500μmol·L^-1范围内不同浓度硫酸铜溶液的96孔板中，分别加入0到1000μmol·L^-1还原型谷胱甘肽GSH溶液，振荡器充分混匀，反应30min后在酶标仪上测定荧光强度，然后根据数据绘出荧光强度与GSH浓度的线性关系图。