[发明专利]间充质干细胞中MACF1基因条件性敲除小鼠模型的建立及其应用

权利要求书

1.一种间充质干细胞中MACF1基因条件性敲除小鼠模型的建立方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)选用MACF1^flox/+小鼠自交，扩繁获得纯合子MACF1^flox/flox小鼠；

(2)选用Prrx1^Cre转基因小鼠与SPF级C57BL/6J小鼠交配，扩繁获得Prrx1^Cre转基因小鼠；

(3)将获得的MACF1^flox/flox小鼠与获得的Prrx1^Cre转基因小鼠交配，获得半敲Prrx1^Cre；MACF1^flox/+小鼠；

(4)将获得的半敲Prrx1^Cre；MACF1^flox/+小鼠自交，获得间充质干细胞中条件性敲除基因MACF1小鼠模型，即全敲Prrx1^Cre；MACF1^flox/flox小鼠；

(5)对所得到的MACF1^flox/flox小鼠、Prrx1^Cre小鼠以及Prrx1^Cre；MACF1^flox/flox小鼠利用特异性引物通过PCR方法进行基因型的鉴定。

2.根据权利要求1所述的间充质干细胞中MACF1基因条件性敲除小鼠模型的建立方法，其特征在于：所述特异性引物为一对时，首选

引物MACF1-AP179：5'-AGCGTTTGGTGTTGATTCGAGC-3'和

引物MACF1-AP180：5'-GGCTTGCAGGTACAGGAGGTAG-3'。

3.根据权利要求1所述的间充质干细胞中MACF1基因条件性敲除小鼠模型的建立方法，其特征在于：所述特异性引物为两对时，首选

引物Prrx1-iCre-WT-F：5'-AGCGTTTGGTGTTGATTCGAGC-3'和

引物Prrx1-iCre-WT-R：5'-AGTCCCGGTGACTCCAGCAG-3'；

引物Prrx1-iCre-WT-F：5'-AGCGTTTGGTGTTGATTCGAGC-3'和

引物iCre-Mut-R2：5'-GGCTTGCAGGTACAGGAGGTAG-3'。

4.根据权利要求1所述的间充质干细胞中MACF1基因条件性敲除小鼠模型的建立方法，其特征在于：所述特异性引物为三对时，首选

引物MACF1-AP179：5'-AAAGAAACGGAAATACTGGCC-3'和

引物MACF1-AP180：5'-GCAGCTTAATTCTGCCAAATTC-3'；

引物Prrx1-iCre-WT-F：5'-AGCGTTTGGTGTTGATTCGAGC-3'和

引物Prrx1-iCre-WT-R：5'-AGTCCCGGTGACTCCAGCAG-3'；

引物Prrx1-iCre-WT-F：5'-AGCGTTTGGTGTTGATTCGAGC-3'和

引物iCre-Mut-R2：5'-GGCTTGCAGGTACAGGAGGTAG-3'。

5.根据权利要求1所述的间充质干细胞中MACF1基因条件性敲除小鼠模型的建立方法所建立小鼠模型的用途，其特征在于：

第一方面，所述小鼠模型用于研究MACF1基因在骨骼发育及骨形成中的功能；

第二方面，所述小鼠模型用于研究MACF1基因在骨形成细胞的骨架结构及在其形态、增殖、迁移、分化和凋亡这些细胞生命活动中的作用；

第三方面，所述小鼠模型作为颅骨发育不全以及骨质疏松症等骨形成障碍性疾病发病机制研究的动物模型；

第四方面，所述小鼠模型用于筛选改善或治疗颅骨发育不全以及骨质疏松症等骨形成障碍性疾病的候选药物；

第五方面，所述小鼠模型用于研究MACF1基因在间充质干细胞成骨、成脂和成软骨多项分化中的作用；

第六方面，所述小鼠模型用于研究MACF1基因对脂肪形成或软骨形成的作用。