[发明专利]一种梅叶冬青组织培养快速繁殖方法

权利要求书

1.一种梅叶冬青组织培养快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：

a、选取健康无病虫害8-12cm的梅叶冬青当年新抽带芽枝条，去除枝条的叶，用酒精棉拭去枝条表面的灰尘并剪成3-5段，每段带有1-2个休眠芽点的枝段作为外植体；

b、将外植体灭菌，然后将灭菌后的外植体插入初代诱芽培养基中培养诱导出腋芽或顶芽，培养条件为：1500-2000Lx，24℃-28℃，光照时间12h-14h，黑暗时间12h-10h，所述的初代诱芽培养基每升由以下成分组成：1mg ZT、0.05mg NAA、6.2g琼脂、0.1g肌醇、30g蔗糖，余量为MS培养基，pH 5.8-6.0；

c、将腋芽或顶芽切下，接入不定芽增殖培养基中进行增殖培养获得不定芽，培养条件为：1500-2000Lx，24℃-28℃，光照时间12h-14h，黑暗时间12h-10h，所述的不定芽增殖培养基每升由以下成分组成：1mg 6-BA、0.05mgNAA、6.2g琼脂、0.1g肌醇、20g蔗糖，余量为MS培养基，pH 5.8-6.0；

d、将不定芽接入壮苗培养基进行壮苗培养得到无根壮苗，培养条件为：1500-2000Lx，24℃-28℃，光照时间12h-14h，黑暗时间12h-10h，所述的壮苗培养基每升由以下成分组成：0.1mg 6-BA、0.1mg NAA、6.2g琼脂、0.1g肌醇、20g蔗糖，余量为MS培养基，pH 5.8-6.0；

e、将2-3cm高带有3-5个叶片的无根壮苗接入生根诱导培养基中培养得到组培苗，培养条件为：1500-2000Lx，24℃-28℃，光照时间12h-14h，黑暗时间12h-10h，所述的生根诱导培养基每升由以下成分组成：1mg IBA、0.02g AC、6.2g琼脂、0.1g肌醇、20g蔗糖，余量为1/2MS培养基，pH 5.8-6.0；

f、将组培苗进行移栽培养。

2.根据权利要求1所述的梅叶冬青组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述的步骤b的将外植体灭菌是在无菌操作台上，将外植体置于体积分数75％酒精溶液中浸泡30s；移到无菌工作台上，将酒精消毒的外植体放入锥形瓶中，加入质量分数0.1％的升汞水溶液，滴加1滴吐温，浸泡10-15min，中间晃动数次，最后用无菌水冲洗3次，得到灭菌处理的外植体。

3.根据权利要求1所述的梅叶冬青组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述的步骤f的移栽培养是待组培苗生根5-10条，根长1-2cm时，将组培苗移到温度湿度与外界相一致的培养室中，4天后打开瓶盖，使生出根的组培苗与外界保持较高的接触，7天后加水取出生根苗，洗净基质，用质量分数0.1％高锰酸钾水溶液浸泡1-3min，移入珍珠岩：蛭石体积比＝3:2的培养基中。