[发明专利]一种番茄叶片保卫细胞游离钙离子浓度的荧光指示剂检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物检测领域，特别是涉及一种番茄叶片保卫细胞游离钙离子浓度的荧光指示剂检测方法。

背景技术

Ca²⁺作为细胞内的第二信使，参与ABA等激素诱导的气孔运动中。同时许多生物或非生物胁迫都会引起植物细胞胞质内Ca²⁺浓度([Ca²⁺]_cyt)的变化，植物会根据[Ca²⁺]_cyt变化的差异解码不同的刺激从而使细胞作出相应的反应。比如叶片上的保卫细胞在受到外界刺激时其膜电位会发生变化，从而引起[Ca²⁺]_cyt的变化，但每一个成熟的保卫细胞由于不是同步发育的，造成每个保卫细胞有其独有的信号转导方式。一部分保卫细胞[Ca²⁺]_cyt在某种环境的诱导下会发生变化，可能会表现为胞质内Ca²⁺浓度的上升，这种上升幅度的不同产生了不同的“钙信号”，最终导致了外界环境刺激下气孔的不同步关闭或打开。

现在一般认为细胞对许多外界环境和激素等刺激作出的反应是通过细胞胞质中游离Ca²⁺浓度变化来传递的，因此检测细胞内[Ca²⁺]_cyt的变化对于研究信号转导是非常重要的。近年来钙离子的荧光测定法得到不断的发展，包括定性及定量测定技术，能够在亚细胞水平实时、无损伤的研究细胞内[Ca²⁺]_cyt的变化。但目前的荧光指示剂检测方法存在不同植物组织中检查灵敏度差异大，不同植物组织荧光指示剂装载条件的差异性且番茄叶片保卫细胞中没有优化的具体指示剂荧光检测方法的问题。

发明内容

基于上述现有技术所存在的问题，本发明提供一种番茄叶片保卫细胞游离钙离子浓度的荧光指示剂检测方法，能间接直观地检测番茄叶片保卫细胞游离钙离子浓度。

为解决上述技术问题，本发明提供一种番茄叶片保卫细胞游离钙离子浓度的荧光指示剂检测方法，包括：

本发明实施例提供一种番茄叶片保卫细胞游离钙离子浓度的荧光指示剂检测方法，包括：

步骤1，配制设定浓度的荧光指示剂工作液；

步骤2，获取番茄叶片下表皮；

步骤3，将配制的所述荧光指示剂溶液装载至获取的所述番茄叶片下表皮；

步骤4，用激光扫描共聚焦显微镜对装载所述荧光指示剂溶液的所述番茄叶片下表皮进行荧光图像采集，根据所采集的荧光图像确定番茄叶片保卫细胞游离Ca²⁺浓度。

本发明的有益效果为：通过将配制好的设定浓度荧光指示剂工作液装载至获取的番茄叶片下表皮，并利用激光扫描共聚焦显微镜对装载所述荧光指示剂溶液的所述番茄叶片下表皮进行荧光图像采集，进而间接测定番茄叶片保卫细胞游离Ca²⁺浓度。该方法检测准确，操作方便。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域的普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他附图。

图1为本发明实施例提供的番茄表皮保卫细胞中不同浓度的Fluo-8AM装载效果图；

图2为本发明实施例提供的不同温度及时间条件下Fluo-8AM的装载情况图。

具体实施方式

下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明的保护范围。

本发明实施例提供一种番茄叶片保卫细胞游离钙离子浓度的荧光指示剂检测方法，包括：

步骤1，配制设定浓度的荧光指示剂工作液；优选荧光指示剂工作液的浓度为10μM；

步骤2，获取番茄叶片下表皮；

步骤3，将配制的所述荧光指示剂溶液装载至获取的所述番茄叶片下表皮；

步骤4，用激光扫描共聚焦显微镜对装载所述荧光指示剂溶液的所述番茄叶片下表皮进行荧光图像采集，根据所采集的荧光图像确定番茄叶片保卫细胞游离Ca²⁺浓度。

上述检测方法中，荧光指示剂采用Fluo-8AM。

上述检测方法中，配制荧光指示剂溶液包括：