[发明专利]一种用于检测哺乳动物莱姆病的荧光素酶免疫共沉淀试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于检测哺乳动物莱姆病的荧光素酶免疫共沉淀试剂盒，包含以下组分：(1)样本稀释液；(2)海肾荧光素酶和伯氏疏螺旋体表膜蛋白OspC抗原组成的融合蛋白液；(3)proteinA/G包被的酶标板；(4)洗涤液；(5)荧光素酶底物。本发明采用荧光素酶免疫共沉淀法，根据荧光强度可以用于检测莱姆病及其发病时期，该方法快速简便、高灵敏度、高信噪比，测量值稳定可靠。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，特别涉及一种用于检测哺乳动物莱姆病的荧光素酶免疫共沉淀试剂盒。

背景技术

莱姆病是一种以蜱为媒介的螺旋体感染性疾病，是由伯氏疏螺旋体所致的自然疫源性疾病。我国于1985年首次在黑龙江省林区发现本病病例，以神经系统损害为该病最主要的临床表现。其神经系统损害以脑膜炎、脑炎、颅神经炎、运动和感觉神经炎最为常见。其中一期莱姆病仅用抗生素即可奏效，至二期、三期用抗生素无济于事，特别是神经系统损害更乏特效疗法。早期以皮肤慢性游走性红斑为特点，以后出现神经、心脏或关节病变，通常在夏季和早秋发病，可发生于任何年龄，男性略多于女性。发病以青壮年居多，与职业相关密切。以野外工作者、林业工人感染率较高。

现有莱姆病的检测方法如下：

一、病原学检测

1.直接检测法：取感染动物的组织、血液或者蜱中肠等直接进行涂片后用显微镜暗视野观察，这种常规的直接法较可靠，但需要丰富的检测经验，同时，无法检测到混合感染的情况，容易漏检，与其他检测方法相比，直接检查的检出率相对较低。

2.分离培养法：采集感染动物的血液、尿液等，接种到培养基上进行培养；或者用传播媒介蜱类分组，75％酒精浸泡、生理盐水漂洗、无菌水清洗，然后置于无菌研磨器中研磨，研磨过程中加入少量BSK培养基，研磨后离心取上清接种至BSK培养基中，33℃培养7～10d，采用常规显微镜暗视野观察。螺旋体生长缓慢，对大部分样品老说很难分离培养出螺旋体，分离率低、耗时较长、敏感性差。

二、血清学检测

3.免疫荧光法(IFA)：将抗原固定在载体上，利用阳性血清检测样本的抗原性，再用荧光二抗来显色，判断样本的感染情况。但IFA只能检测到菌体表面的抗原，灵敏度和特异性都比较低。IFA受实验影响大，人为干扰因素比较多，易造成假阳性或假阴性。

4.酶联免疫法(ELISA)：酶联免疫主要是对莱姆病特异性抗体IgG进行检测，对于酶的活性和灵敏度要求很高，其特异性取决于抗原制备的优劣；且其结合物制备尚未标准化，这使得实验结果的可重复性不高，需要进行多次检测。另外，若抗原及酶结合物浓度低，最后吸光度值太小，易出现假阴性。

5.免疫印迹法：特异性较高，有一定的应用价值，但操作比较复杂，一般实验室不易做到。

6.聚合酶链式反应(PCR)：是敏感特异的方法，但由于病人菌血症时间短且不规则，在临床实验室诊断中有其根本的局限性，与PCR在诊断其他病院微生物方面一样，也具有明显的误导作用，目前仍处于实验室研究阶段。

发明内容

本发明的目的在于提供一种一种用于检测哺乳动物莱姆病的荧光素酶免疫共沉淀试剂盒，采用荧光素酶免疫共沉淀法，根据荧光强度可以用于检测莱姆病及其发病时期，该方法快速简便、高灵敏度、高信噪比，测量值稳定可靠。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种用于检测哺乳动物莱姆病的荧光素酶免疫共沉淀试剂盒，包含以下组分：(1)样本稀释液；(2)海肾荧光素酶和伯氏疏螺旋体表膜蛋白OspC抗原组成的融合蛋白液；(3)proteinA/G包被的酶标板；(4)洗涤液；(5)荧光素酶底物。