[发明专利]一种猪流行性腹泻病毒变异株灭活疫苗及其应用

说明书

技术领域

本发明属于兽用生物制品领域，具体涉及一种猪流行性腹泻病毒变异株灭活疫苗及其应用。

背景技术

猪流行性腹泻病毒（Porcine Epidemic Diarrhea Virus，PEDV）系冠状病毒科冠状病毒属成员，可引起以呕吐、腹泻和脱水为特征的猪肠道传染性疾病。各种年龄的猪均易感，但哺乳仔猪受害最严重，死亡率可高达100%。近几年我国多省爆发PED，给养猪业造成了严重的经济损失。目前尚无特效药物治疗猪流行性腹泻，该病的防控以疫苗预防接种为主。国外使用的疫苗主要为韩国弱毒株，国内主要是哈尔滨兽医研究所研制的猪流行性腹泻、猪传染性胃肠炎二联灭活苗等，此疫苗中使用的毒株为猪流行性腹泻病毒PEDV CV777株，该毒株分离年代较早，与新变异株相比缺乏广泛的免疫原性，因此筛选新毒株，制备行猪流行腹泻疫苗用于预防猪流行性腹泻是十分必要的。

发明内容

本发明的目的是提供一种猪流行性腹泻病毒变异株灭活疫苗的制备方法以及该灭活疫苗免疫怀孕母猪后的保护效果，从而弥补现有疫苗的不足。

为实现上述目的，本发明采用了如下技术手段：

本发明提供了一种猪流行性腹泻病毒变异株灭活疫苗，是由腹泻病毒变异株PEDV/CH/BJ/2014株灭活后制备取得。

所述灭活疫苗中病毒含量≥107TCID50/mL。

本发明还提供了一种猪流行性腹泻病毒变异株灭活疫苗的制备方法，包括以下步骤：腹泻病毒经接种Vero细胞（非洲绿猴肾细胞），于37℃ 5% CO2培养箱中培养，细胞病变达到80%以上时收获病毒液、浓缩，经0.2%的β-丙内酯于4℃灭活24至48小时后得到疫苗原液，加入ISA201VG水包油包水双相佐剂乳化即得该病毒疫苗。

本发明的猪流行性腹泻病毒PEDV/CH/BJ/2014株，于2014年12月4日保藏于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.10111。

本发明的PEDV/CH/BJ/2014株用于制备预防猪流行性腹泻的疫苗。与现有的病毒比较，本发明所筛选的猪流行性腹泻病毒PEDV/CH/BJ/2014株制备的疫苗免疫原性好，抗体产生快，产生的抗体滴度高且维持时间长；免疫剂量小，在产前30天前进行免疫注射可使怀孕母猪所产仔猪获得较好的被动免疫，能够有效抵抗强毒株的攻击，提高仔猪的存活率。

附图说明

图1：PEDV灭活疫苗免疫断奶仔猪中和抗体测定结果柱形图，其中黑色柱形为实验组，灰色柱形为对照组。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细说明，以使本领域技术人员能更好地理解本发明并予以实施，但实施例并不作为本发明的限定。

实施例1：猪流行性腹泻病毒PEDV/CH/BJ/2014株的筛选

1 猪流行性腹泻病毒PEDV/CH/BJ/2014株的分离和鉴定

在流行病学调查时，从北京某猪场送检的腹泻仔猪小肠内容物中分离到1株猪流行性腹泻病毒（命名为PEDV/CH/BJ/2014株），猪流行性腹泻病毒RT-PCR检测阳性，盲传2代细胞病变，第3代出现规律、稳定的细胞病变，第5代时病毒含量可达到5×10⁵TCID₅₀/mL，能够被抗猪流行性腹泻病毒特异性血清中和，将猪流行性腹泻病毒PEDV/CH/BJ/2014株，于2014年12月4日保藏于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.10111。

2 用分离得到的PEDV/CH/BJ/2014株制备疫苗

2.1 病毒液的制备