[发明专利]一种用于检测肝癌的引物组及检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及肿瘤基因领域，具体涉及一种用于检测肝癌的引物组及检测方法。

背景技术

肝癌是世界上第五大最常见的恶性肿瘤，肝细胞癌是肝脏恶性肿瘤中最重要的病理类型，也在肿瘤相关的死亡原因中排名第三，从发现症状到死亡，患者生存时间不超过1年。肝癌的高病死率主要有两个原因，其一是肝癌只有发展到较晚阶段时才会出现临床症状，其二是晚期肝癌缺乏有效的治疗手段。因此，在大部分情况下，肝癌确诊时已经错过了最佳治疗时间。

肝癌主要发生于亚洲等地区的发展中国家，具有较典型的地理区域分布特点。近几十年中，在美国和欧洲的发达国家中，肝癌的发病率也有很大的提高。据估计，在未来的20年中，肝癌的发病率和病死率将再增加1倍。到目前为止，尽管多种对于肿瘤的治疗措施可用于降低肿瘤相关的病死率，但是在包括英国和美国等很多发达国家中，肝癌的病死率仍然没有显著的降低。为了克服这个巨大的挑战，当前医学研究的焦点集中于怎样对肝癌进行早期诊断，以便于肝癌的及时治疗.

目前肝癌的诊断方法包括影像学检查，细胞病理学和组织病理学诊断。影像学检查包括CT扫描、核磁共振检查等，但是其效率较低并且检测准确度不高。通常的细胞和组织病理学检测包括细胞活检，需要通过外科手术或者穿刺的方法从患者上获取肿瘤组织的检材。不但不方便，而且会对患者造成人体伤害。近来，循环肿瘤细胞(Circulating Tumor Cells，CTCs)检测的出现给患者的检测带来了新的希望。CTCs是从肿瘤病灶脱离并移位至血液中的肿瘤细胞，是恶性肿瘤患者术后复发和远处转移的重要原因，也是导致肿瘤患者死亡的重要因素。与其他组织学标本如骨髓等相比，外周血标本容易获取，且对患者创伤小，是临床上常规检测较为理想的标本来源。CTCs检测有助于肿瘤的早期诊断、判断患者预后、评估抗肿瘤药物的疗效及制定个体化治疗方案。与传统的诊断方法相比，CTCs检测可更加敏感地发现疾病的变化，且对患者没有副作用。

CTC的检测通常通过抽取一定体积的血液进行。检测分为两类，包括不捕获(富集)直接检测和先捕获(富集)后检测，其中后者为主流的检测方法。先捕获(富集)后检测的方法也分为两类，即正选和负选。正选主要是通过CTC表面标志物或细胞的物理性质(大小、密度)进行捕获；前者是基于免疫磁球技术和微流控芯片技术，后者是基于过滤、离心的原理。负选则是通过白细胞表面标志物间接捕获CTC。然而基于先捕获(富集)后检测的方法有着明显的缺陷。它严重依赖于肿瘤细胞表面标记物的表达，因此无法捕获未表达表面肿瘤标记物的CTC细胞。

采用RT-PCR的方法检测CTC细胞的特异性基因是CTC细胞检测的另外一种方式。首先抽取一定体积的血液，通过密度梯度离心的方式富集CTCs，然后通过RT-PCR的方式检测特定基因的mRNA，以此判断CTCs是否存在，并通过检测CT值的变化给CTCs定量。这种方法检测CTCs费用低，敏感度高，而且容易自动化。

目前RT-PCR方法检测肝癌的CTCs检测的标准还没有建立。我们通过检测肝癌患者的CTCs特征基因，确定肝癌CTCs的检测方法和检测标准。这些检测方法和标准的建立有助于肿瘤患者的早期诊断、判断患者预后、评估抗肿瘤药物(包括NK和CAR-T免疫治疗)的疗效及制定个体化治疗方案。

针对上述问题，本发明开发一种高灵敏的多基因联合检测的试剂盒，通过联合检测AFP、GPC3、AFU、GOLPH2、IGF-II、EpCAM、hTERT、MAGE1、MAGE3、CD90、CD133

、CK19、CD10、ASGPR、CPS1、HER2、Folate Receptor 17个基因实现肿瘤的早期筛查或诊断。本发明设计运用靶向特异性引物组，大幅度提高检测的灵敏度。该检测方法的检出率可达到98％，同时具备了灵敏度高，特异性好，快速准确等优点。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种用于检测肝癌的引物组及检测方法。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的，一种用于检测肝癌的引物组，包含：

本发明的引物组可通过以下两种方法实现肝癌的检测。

方法1：PCR方法。