[发明专利]低分子量PEG修饰剂含量测定方法

说明书

本发明公开了一种低分子量PEG修饰剂含量测定方法，首先通过FID检测器建立PEG测定标准曲线，将待检测液加适量纯水稀释到适当浓度，采用毛细管柱，载气为高纯氮，柱流量为1mL/min,汽化室温度为250℃，采用FID检测器，温度250℃，柱温为150℃条件下测定峰面积，根据标准曲线，得到待检测液中低分子量PEG修饰剂的含量。采用气相色谱进行定量检测分析，所建方法快速，简便，准确，可以广泛应用低分子量的PEG修饰剂或药物的含量测分析检测。

技术领域

本发明属于药物分析技术领域。

背景技术

聚乙二醇(PEG)是一种pH中性，无毒，且具有独特理化性质和良好生物相容性的亲水高分子聚合物，也是经FDA批准的极少数可以体内注射的合成聚合物之一。当PEG偶联到蛋白质、多肽、小分子有机药物或纳米颗粒外壳上时，可以降低药物制剂的免疫清除以及肾脏的快速消除，延长药物的体内循环时间，减小药物的毒性。作为新型的药用辅料，PEG的质量控制以及在体内的吸收、分布与排泄过程对于PEG化药物的设计与评价具有十分重要的意义。

二乙二醇修饰剂一种新型的功能性PEG修饰剂，是迄今为止已知聚合物中蛋白和细胞吸收水平最低的聚合物，由于二乙二醇无毒及良好的生物相容性，该药物修饰是将活化的二乙二醇通过化学方法偶联到药物上，改善药物的理化性质和生物学活性，改进了药物动力学和药效等性质，显著增强药物的溶解性和稳定性，减少免疫原性和抗原性，降低毒副作用，增加了体内生物活性和疗效等功效，这种技术现已开始应用于蛋白质(肽类)、酶、抗体及小分子药物中。

目前对于PEG的分析常采用放射性标记法、比色法、Western Blot和高效液相色谱法(HPLC)，但这些方法均存在明显的不足。例如，放射性标记法用于标记PEG时成本太高，且目前尚未建立成熟的方法学检验标记效率，也没有对比试验说明标记后的PEG在体内的动力学行为是否发生了变化；比色法和Western Blot法都不能得到精确的定量结果，且后者是通过测定与PEG结合的抗体量来间接对PEG进行定量。鉴于抗体的选择性差，可能和样本中存在的内源性干扰物质结合，故不适合血浆或组织等复杂生物样本中PEG的定量分析；HPLC法采用折射率检测器，分析时间长，且定量下限仅为50mg/mL，不足以分析生物体内痕量的PEG水平。

发明内容

本发明的目的是提供一种低分子量PEG修饰剂含量测定方法。

为达到上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种低分子量PEG修饰剂含量测定方法，采用气相色谱法进行检测，检测步骤为：

1)通过FID检测器首先建立PEG测定标准曲线，采用毛细管柱，载气为高纯氮，柱流速为1mL/min，汽化室温度为250℃，采用FID检测器，温度250℃，柱温为150℃，进样量为1uL，测定浓度为1、2、3、4、5ug/mL的标准溶液，得到PEG测定标准曲线，峰面积与浓度线性关系良好，R2＝0.992；

2)将待检测液加适量纯水稀释到适当浓度，采用毛细管柱，载气为高纯氮，柱流量为1mL/min,汽化室温度为250℃，采用FID检测器，温度250℃，柱温为150℃条件下测定峰面积；

3)根据标准曲线，得到待检测液中低分子量PEG修饰剂的含量。

进一步地，所述的低分子量PEG修饰剂指的是分子量为2000以内的PEG修饰剂。

进一步地，所述的低分子量PEG修饰剂为二乙二醇丙酸甲酯、二乙二醇丙酸乙酯、二乙二醇丙酸正丁酯中的任意一种。

有益效果：

本发明根据低分子量PEG修饰剂的结构特性，采用气相色谱进行定量检测分析，所建方法快速，简便，准确，有望应用低分子量的PEG修饰剂或药物的含量测分析检测。

附图说明