[发明专利]一种用于治疗肺癌基因靶载体复合物及其制备方法在审

专利信息
申请号: 201710014980.4 申请日: 2017-01-09
公开(公告)号: CN106692988A 公开(公告)日: 2017-05-24
发明(设计)人: 董兵;郭永军;马杰 申请(专利权)人: 河南省肿瘤医院
主分类号: A61K48/00 分类号: A61K48/00;A61K9/127;A61K47/42;A61K47/28;A61P35/00;C12N15/87
代理公司: 西安铭泽知识产权代理事务所(普通合伙)61223 代理人: 潘宏伟
地址: 450008 河*** 国省代码: 河南;41
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摘要:
搜索关键词: 一种 用于 治疗 肺癌 基因 载体 复合物 及其 制备 方法
【权利要求书】:

1.一种用于治疗肺癌基因靶载体复合物,其特征在于:该用于治疗肺癌基因靶载体复合物的组成成分如下:

人体肺癌细胞株5-10份、CD147纳米基因载体纳米颗粒混悬液4-8份、碳化二亚胺盐酸盐2-8份、脂质体载体5-10份、兔抗人CD147单克隆体4-8份、实验用水0.5-1.5份、血清液5-10份、基因转染试剂4-8份、DNA聚合酶4-8份、限制性内切酶4-8份。

2.根据权利要求1所述的一种用于治疗肺癌基因靶载体复合物,其特征在于:所述脂质体载体为N-三甲基溴化铵胆固醇微粒。

3.根据权利要求1所述的一种用于治疗肺癌基因靶载体复合物,其特征在于:所述CD147纳米基因载体纳米颗粒混悬液为15g/L的CD147纳米基因载体纳米颗粒混悬液。

4.根据权利要求1所述的一种用于治疗肺癌基因靶载体复合物,其特征在于:所述转染试剂为聚合物转染试剂。

5.根据权利要求1所述的一种用于治疗肺癌基因靶载体复合物,其特征在于:所述实验用水为三蒸水。

6.一种用于治疗肺癌基因靶载体复合物制备方法,其特征在于:该用于治疗肺癌基因靶载体复合物制备方法包括如下步骤:

S1:靶向基因载体识别功能的添加:将兔抗人CD147单克隆体配置成1g/L,的溶液,再将其与浓度为15g/L的CD147纳米基因载体纳米颗粒混悬液等体积混悬于含有碳化二亚胺盐酸盐的实验用水中,在4摄氏度条件下振荡8小时,再在磁性分离器中收集含有磁性成份的纳米颗粒,制成识别CD147蛋白的磁性纳米基因载体;

S2:基因载体与质粒的复合:将增加识别CD147蛋白的磁性纳米基因载体与脂质体载体进行混合,再加入DNA聚合酶,由于在静电荷力和分子间作用力的作用,使得DNA分子折叠,形成粒状的复合物;

S3:复合物与靶细胞的融合:先将配制的粒状复合物与人体肺癌细胞株在基因转染试剂的条件下进行转染处理,再将复合物与人体肺癌细胞株在血清液中进行融合,通过人体肺癌细胞株的内吞或者吞噬作用,使得复合物进入到人体肺癌细胞中,在细胞内紧密的复合物对DNA起到保护作用,使得DNA避免被核酸酶降解;

S4:基因载体和目的基因的脱离:在复合物与靶细胞的融合物中加入限制性内切酶,目的基因通过核膜孔或者是在分细胞分裂过程中进入细胞核,修补缺失基因或者相关异常基因,而靶向性载体则分解成小分子化合物通过细胞新陈代谢排出细胞;

S5:靶向基因载体的检测:对复合物制备过程和复合物对肺癌细胞的作用进行实时检测。

7.根据权利要求6所述的一种用于治疗肺癌基因靶载体复合物制备方法,其特征在于:所述步骤S5中对复合物制备过程和复合物对肺癌细胞的作用进行实时检测的检测内容包括肺癌细胞CD147表达量的检测、细胞吞噬效果的检测、细胞功能蛋白表达量的检测、复合物安全性检测、完成基因载体和目的基因的脱离过程后的肺癌细胞的增殖能力的检测、细胞迁移能力的检测。

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