[发明专利]一种珍稀濒危植物四药门花组织培养快繁方法

说明书

技术领域

本发明属于珍稀濒危植物组织培养快繁方法，具体涉及一种珍稀濒危植物四药门花组织培养快繁方法。

背景技术

四药门花(Loropetalum subcordatum)是金缕梅科(Hamamelidaceae)檵木属常绿灌木或小乔木，是中国特有的残遗植物，是我国二级保护植物(于永福.中国野生植物保护工作的里程碑——《国家重点保护野生植物名录(第一批)》出台[J].植物杂志,1999(05):3.)。四花门花株形优美，花期长，也是一种极具应用价值的景观植物，仅我国分布于广西木论、贵州茂兰、广东中山以及香港几个地区，因其分布区域狭窄，且数量极少，被列为IUCN(International Union ForConservation Of Nature)稀有植物和中国国家重点保护野生植物(张宏达.中国植物志:金缕梅科[M].北京:科学出版社,1979.)。对四药门花的生殖生态学研究发现，种群存在自交衰退现象，其自然结实率仅有4.79％，即使辅以人工异株授粉，其结实率也仅有6.67％(顾垒,张奠湘.濒危植物四药门花的自花授粉[J].植物分类学报,2008,46(5):651–657.)。为保护现有的种质资源，减轻资源压力，扩大种群数量，并能实现推广利用，组织培养快速繁殖成为重要的手段，能够为迁地保护和扩大种群提供新技术支撑。

组织培养是一种能快速无性繁殖的方法，繁殖周期短，繁殖系数大，遗传稳定，能够保存亲本优良的性状，被广泛的用于有性繁殖困难或缓慢的植物种类以及自然种群稀少的濒危植物的保护中。

发明内容

为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的目的在于提供一种珍稀濒危植物四药门花组织培养快繁方法。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种珍稀濒危植物四药门花组织培养快繁方法，包括外植体灭菌处理、外植体启动培养、继代培养、生根培养以及移栽等过程，具体包括如下步骤：

(1)外植体灭菌与外植体启动培养：以四药门花植株新梢茎段为外植体，选取树姿优美，生长健壮，无病虫害的植株采摘当年生枝条，将枝条剪去叶片，保留叶柄，用软毛刷蘸洗洁精水轻轻刷洗枝条，用自来水冲洗干净后置于超净工作台上，剪成长2.0cm左右，含1～2个叶腋芽的茎段，用0.1％升汞溶液灭菌处理5～12min，期间不断摇动，用无菌水冲洗5～6次，接种到外植体启动培养基进行叶腋芽诱导，12天左右开始有芽萌动，35天左右萌芽约2.0cm长，能够进行下一步的继代培养；

(2)继代培养：将步骤(1)诱导得到的叶腋芽分别接种于增殖培养基上进行继代培养，将伸长的叶腋芽剪切成茎段接入新的增殖培养基，如此反复，得到大量丛生芽；继代培养中许多培养瓶中的苗都有生根现象，而且有的根系发育良好，说明四药门花是非常容易生根的树种。

(3)生根培养：将步骤(2)继代培养得到的丛生芽切割成带顶芽茎段接种于生根培养基中进行诱导生根，10天左右开始萌生小根，30天左右长出大量健壮的根系。

(4)炼苗移栽：将步骤(3)获得的生根苗移至温室，将高3cm以上且根系发达、茎叶健壮的无菌生根苗取出，洗净在根系上附着的培养基，移栽到适宜湿度的装入穴盘的基质中，盖上透明塑料穴盘盖保湿，每10天左右根据基质湿度进行喷水管理。约一周左右便有新叶长出，30天内顶芽伸长，叶片长大，叶色由深绿色变成草绿色。30天后揭去塑料盖，45天后移栽至营养钵中，成活率可达100％。

步骤(1)中所述的消毒的时间优选为10～12min；更优选为10min。

步骤(1)中所述的外植体启动培养基为：MS+6-BA 0.5～2.0mg·L^-1+IBA 0.1～0.2mg·L^-1+卡拉胶9g·L^-1+蔗糖30g·L^-1，pH调至5.8～6.0。

优选为：MS+6-BA 1.0mg·L^-1+IBA 0.2mg·L^-1+卡拉胶9g·L^-1+蔗糖30g·L^-1，pH调至5.8～6.0。