[发明专利]一种发酵法生产替考拉宁并调控其组分含量的方法

说明书

本发明属于医药技术领域，提供了一种发酵法生产替考拉宁并调控其组分含量的方法。将成熟的种子接种到发酵罐中培养，接种量10％；全程发酵温度28℃，罐压0.03‑0.05MPa，搅拌转速600rpm，气比0.4‑0.6v/v/m；当发酵液pH降至5.8后回升至6.0时，补入发酵液体积0.4％的正丁醇；待发酵的pH值回升至6.8时补入0.04％质量的缬氨酸，24h后补入0.02％质量的缬氨酸，补料后继续培养至放罐。本发明经过改进发酵调控技术后，发酵液中替考拉宁A₂(TA₂)五个组分的含量均能符合欧洲药典要求，可大幅度地降低生产成本和提高产品质量。

技术领域

本发明涉及抗生素发酵领域，具体涉及一种通过发酵调控来影响微生物代谢流，从而改变不同组分含量的方法。

背景技术

替考拉宁系替考游动放线菌发酵产生的一种糖肽类抗生素，为六个主要组分和四个次要组分的混合物。替考拉宁A₂(TA₂)是替考拉宁的主要组分，它是由五个化学结构十分相似的组分(TA_2-1TA_2-2TA_2-3TA_2-4TA_2-5)的复合物，五个组分中以TA_2-2为主要有效成分。替考拉宁A₂(TA₂)五个组分的差异在于酰基侧链的不同，各组分在物理化学性质方面极为相似，常规的分离纯化方法很难让这五个组分实现有效分离。

欧洲药典关于替考拉宁组分含量的要求如下：

如果发酵过程中产生的替考拉宁A₂(TA₂)五个组分含量不能得到合理调控，单靠提取过程很难达到欧洲药典关于组分含量的要求。即使通过一定的纯化手段使产品符合药典的要求，也会导致收率极低、生产成本急剧增加。因此通过发酵调控使替考拉宁A₂(TA₂)五个组分的含量符合药典的要求，可大幅度地降低生产成本和提高产品质量。

发明内容

本发明是为了解决原有发酵工艺条件下发酵液中替考拉宁A₂(TA₂)五个组分的比例不符合欧洲药典的问题，经过改进发酵调控技术后，发酵液中替考拉宁A₂(TA₂)五个组分的含量均能符合欧洲药典要求，不需要在发酵后通过纯化手段调节替考拉宁组分含量，可大幅度地降低生产成本和提高产品质量。

本发明人在优化发酵工艺时发现，通过适时的发酵调控和补料可有效提高替考拉宁的发酵产量和控制替考拉宁A₂(TA₂)五个组分的含量在药典要求合理范围内。

一种发酵法生产替考拉宁并调控其组分含量的方法，将种子培养基培养的成熟的种子接种到含有发酵液培养基的发酵罐中培养，接种量10％；全程发酵温度28℃，罐压0.03-0.05MPa，搅拌转速600rpm，气比0.4-0.6v/v/m；当发酵液pH降至5.8后回升至6.0时，补入发酵液体积0.4％的正丁醇；待发酵的pH值回升至6.8时补入0.04％质量的缬氨酸，24h后补入0.02％质量的缬氨酸，补料后继续培养至放罐。

所述的一种发酵法生产替考拉宁并调控其组分含量的方法，种子培养基配比如下：

所述的一种发酵法生产替考拉宁并调控其组分含量的方法，发酵培养基配比如下：

所述的一种发酵法生产替考拉宁并调控其组分含量的方法，发酵液培养基使用纯化水配制，消毒前使用10％液碱调节pH值至7.0-7.2，消毒温度121℃，维持25分钟。

具体实施方式：