[发明专利]兼顾特异性和灵敏度的免疫球蛋白G4亚型IgG4检测试剂盒

说明书

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种兼顾特异性和灵敏度的免疫球蛋白G4亚型IgG4检测试剂盒。为解决现有技术中存在的特异性差和灵敏度低的技术问题，提供一种兼顾特异性和灵敏度的免疫球蛋白G4亚型IgG4检测试剂盒，包括第一试剂，所述第一试剂为标记有糖基化修饰的鼠抗人免疫球蛋白G4单克隆抗体胶乳微球溶液。本发明的试剂盒采用的糖基化修饰鼠抗IgG4单克隆抗体操作简便，能够批量处理抗体，利于产业化；解决了无商业化HBR可用的问题，使得试剂在测定HAMA和RF干扰样本时，相对西门子试剂假阳性率大幅度降低；解决了切除FC段消除RF方法带来的灵敏度不足，本发明的线性范围可达到0.040‑4.000g/L。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种兼顾特异性和灵敏度的免疫球蛋白G4亚型(IgG4)检测试剂盒。

背景技术

正常人的IgG包括四个亚型，其IgG1占60～70％，IgG2占15～20％，IgG3占5～10％，IgG4占1～7％。IgG4相关性疾病是一种与IgG4淋巴细胞密切相关的慢性、系统性疾病，该类疾病以血清IgG4水平升高以及IgG4阳性细胞浸润多种器官和组织为特征，常见受累器官包括泪腺、胰腺和腹膜后间隙等，累及的器官或组织由于慢性炎症及纤维化进程可导致弥漫性肿大。该类疾病对皮质激素治疗反应良好。

IgG4为人体内含量最低的免疫球蛋白G亚型，所以检测试剂需要灵敏度较高，并且，检测试剂需要避免与其他种类的免疫球蛋白以及IgG1-3交叉反应，需要非常高的特异性。最理想的选择是特异性识别IgG4的单克隆抗体。目前仅有西门子的IgG4检测试剂被CFDA(国家食品药品监督管理局)批准广泛被使用，其采用的是高灵敏度的胶乳免疫比浊法。

本领域的免疫试剂开发人员熟知，免疫检测试剂的特异性不仅与抗体特异性相关，更需要屏蔽人体免疫系统对检测试剂所用抗体的干扰(各种人抗动物抗体，统称异嗜性抗体Heterophile Antibody)以及类风湿因子(RF)的干扰。其中20-40％的人群对HAMA(人抗鼠抗体)存在不同程度的干扰，在不发达地区，由于鼠源接触率更高，此比例更高。含有HAMA的人进行检测时，如果检测试剂盒没有抗干扰能力通常会出现假阳性结果，最经典的案例就是上世纪美国HCG早孕试纸假阳性事件。采用鼠源单克隆抗体开发免疫检测试剂时无法回避因HAMA带来的特异性问题。商业化高特异性识别的IgG4的鼠单克隆抗体已经出现多年，消除HAMA以及RF的试剂HBR(Heterophile Antibody Blocking Reagent)也已经在各种使用鼠单克隆抗体的检测试剂盒中被广泛使用，如菲鹏生物的Hire-E-010，迈迪安公司的TRU Blocker，SCantibody公司的HBR系列……。但是，鼠抗人IgG4抗体，其类免疫反应原理似于RF和HAMA，是识别免疫球蛋白本身的抗体，会被上述商业化HBR当做是识别免疫球蛋白的干扰物，并且可能上述HBR试剂中本身含有免疫球蛋白4的亚类；造成HBR与IgG4的鼠单克隆抗体之间交叉反应，使得IgG4检测试剂盒无法使用商业化的HBR屏蔽HAMA以及RF干扰。因此，为了消除RF的干扰，切除抗体FC段的方法在欧洲各诊断试剂公司被广泛采用，但是会损失一定的抗体亲和力，导致检测试剂灵敏度下降，使得必须提高样本量才能满足相应灵敏度不变，导致线性范围下降。在检测西门子IgG4试剂时也发现，HAMA干扰存在一定问题，出现不少假阳性样本。且其试剂灵敏度较低，不能实现较宽线性范围的检测。

发明内容

本发明的目的在于解决以上现有技术中存在的技术问题，提供一种兼顾特异性和灵敏度的免疫球蛋白G4亚型(IgG4)检测试剂盒，该试剂盒有效消除了HAMA和RF干扰，具体地，通过糖基化修饰鼠抗人IgG4单克隆抗体能够有效减弱其被RF和HAMA识别的亲和力，使用糖基化修饰后的鼠单克隆抗体开发免疫球蛋白G4试剂盒能达到减弱HAMA和RF干扰，提高试剂特异性的优点，解决了切除FC段消除RF方法带来的灵敏度不足的技术问题。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：