[发明专利]一种增强植株抗虫性的方法

权利要求书

1.一种增强植株抗虫性的方法，其特征在于，所述增强植株抗虫性的方法包括以下步骤：

步骤一，番茄基因序列Solyc11g069190.1的克隆；

步骤二，含番茄基因序列Solyc11g069190.1的载体构建及其功能鉴定；

步骤三，超量表达载体pLP35S-SlARF4转化番茄；

步骤四，转基因株系的鉴定，获得转基因植株。

2.如权利要求1所述的增强植株抗虫性的方法，其特征在于，所述番茄基因序列Solyc11g069190.1的克隆具体包括：

(1)番茄果实RNA的提取，准备1.5ml离心管，加入450ulLysis Solution PL；分别用液氮迅速研磨番茄果肉组织，研磨至均一细小的粉末，转移至第一步准备好的离心管中，涡旋混合均匀；室温下最大转速离心1min；将蓝色的柱子置于2ml的收集管中，将离心得到的上清液转移到柱子中，在室温12000rpm条件下离心2min；配制70％乙醇溶液，向滤液中加入等体积的乙醇溶液，并且振荡混合均匀；将红色柱子置于收集管中，将得到的滤液转移到柱子中，在室温12000rpm条件下离心2min；弃去滤液和收集管，更换新的收集管；向红色柱子中加入500ul Washing Solution HS，合上盖子；在10000g的条件下离心1min；弃去滤液和收集管，更换新的收集管；向红色柱子中加入650ul Washing Solution LS，合上盖子；在10000g的条件下离心1min；弃去滤液和收集管，更换新的收集管；在室温12000rpm条件下离心2min；弃去收集管，将红色柱子取出置于1.5ml离心管中，加入50ulRnase-free水，室温静置至少1min后，在8000rpm的条件下离心1min；

(2)番茄果实RNA反转录成cDNA，将试剂Total RNA2ug、Oligo(dT)18primer 1ul、Water，nuclease-free to12ul，总体积12ul加入已灭菌无Rnase的离心管中；将离心管中的试剂轻轻混匀，快速离心，置于65℃放置5min，在冰上冷却；将试剂5×Reaction Buffer 4ul、Ribolock RNase Inhibitor 1ul、10mM dNTP Mix2ul、RevertAid M-MuLV RT 1ul加入反应体系中；混匀并且快速离心；置于42℃放置60min；在70℃放置5min终止反应。