[发明专利]一种制备5-异硫氰酸荧光素酯的方法

说明书

本发明提供一种制备5‑异硫氰酸荧光素酯的方法，包括如下步骤：步骤一：以5‑氨基荧光素为原始原料，在催化剂和溶剂作用下，与二硫化碳反应制得荧光素‑5‑二硫胺甲酸盐；步骤二：将步骤一中得到的所述荧光素‑5‑二硫胺甲酸盐，在催化剂和溶剂作用下，反应得到5‑异硫氰酸荧光素酯。本发明工艺操作安全性较高、生产成本低、合成工艺简单、反应条件温和，且5‑异硫氰酸荧光素酯的产率较高，适用范围广，能充分满足产品工业化生产的需求。

技术领域

本发明涉及制备5-异硫氰酸荧光素酯的方法。

背景技术

5-异硫氰酸荧光素酯(5-FITC)是目前应用最广泛的荧光标记试剂之一。其最大吸收光波长为490～495nm，最大发射光波长为525～530nm，呈现出非常便于人眼观测的明亮黄绿色荧光。5-异硫氰酸荧光素酯能和各种抗体蛋白结合，结合后的抗体不丧失与一定抗原结合的特异性，并在碱性溶液中具有强烈的黄绿色荧光。通过在荧光显微镜下观察或流式细胞仪分析可对相应抗原进行定性、定位或定量的检测。5-异硫氰酸荧光素酯也用于医学，农学和畜牧等方面，可对由细菌病毒和寄生虫等所致疾病进行快速诊断。

目前文献报道的制备5-异硫氰酸荧光素酯的方法是以5-氨基荧光素为原料，与硫光气在有机溶剂中反应制得(ACS Med.Chem.Lett.2012，3，774-779)，化学反应式为

该方法有两个非常明显的缺点：第一、所使用的硫光气毒性非常大，气味也非常大，工艺操作安全性很差；第二、硫光气价格较高，公斤级价格在3000元以上，并且购买不便，导致5-异硫氰酸荧光素酯的生产成本居高不下。该合成工艺生产危险性大，并且生产成本高昂，并不适应于工业化生产的需求。

鉴于目前制备5-异硫氰酸荧光素酯的工艺存在生产危险性大，生产成本高昂的问题，因此，寻找一种绿色合成5-异硫氰酸荧光素酯的工业化生产方法具有非常重要的意义。

发明内容

本发明之目的在于提供一种生产危险性小、成本较低的制备5-异硫氰酸荧光素酯的工业化生产方法。

为解决上述技术问题，根据本发明的第一方面，提供一种制备5-异硫氰酸荧光素酯的方法，其中，包括如下步骤：

步骤一：以5-氨基荧光素为原始原料，在催化剂和溶剂作用下，与二硫化碳反应制得荧光素-5-二硫胺甲酸盐，化学反应式为：

步骤二：将步骤一中得到的所述荧光素-5-二硫胺甲酸盐，在催化剂和溶剂作用下，反应得到5-异硫氰酸荧光素酯，化学反应式为：

优选地，步骤一中，所述5-氨基荧光素与二硫化碳的摩尔比为1:1～5。

优选地，所述溶剂为水、甲醇、乙醇、异丙醇、甲苯、二甲苯、乙醚、丙酮、丁酮、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、乙二醇二甲醚、乙二醇二乙醚、二乙二醇二甲醚、乙腈、二甲基甲酰胺(DMF)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)或二甲基亚砜(DMSO)中的一种或多种。

优选地，步骤一中所述催化剂为氨水、氢氧化钠、氢氧化锂、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾、三乙胺、二乙胺、DBU、三丁胺、N,N-二异丙基乙胺、三乙烯二胺、4-二甲胺基吡啶、吡啶中的一种或多种。

优选地，步骤二中所述催化剂为苯磺酰氯、对甲苯磺酰氯、磺酰氯、邻硝基苯磺酰氯、对硝基苯磺酰氯、邻硝基苯磺酰氯、对硝基苯磺酰氯、硫酸铜、氯化铜中的一种或多种。

优选地，所述催化剂的添加量为反应原料总量的1～500wt％。

优选地，所述反应的温度为-20～100℃。

本发明的上述技术方案相比现有技术具有以下优点：