[发明专利]呋喃它酮代谢物AMOZ衍生化半抗原、人工抗原的制备方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及免疫化学技术领域，尤其涉及一种呋喃它酮代谢物AMOZ衍生化半抗原、人工抗原的制备方法及其应用。

背景技术

呋喃类是人工合成的一类共有5-硝基呋喃环结构的抗生素，对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、部分真菌都具有抗菌效果。因价格低廉，被广泛地应用在畜禽和鱼类养殖中，用于治疗由沙门氏杆菌、大肠杆菌引起的肠炎，球虫病等，并且常作为畜牧动物以及水产鱼虾类的生长促进剂被添入饲料中。硝基呋喃类主要包括：呋喃它酮、呋喃西林、呋喃妥因和呋喃唑酮。

其中，在食品安全中，呋喃它酮的大量或连续使用不仅对养殖动物有毒性作用，而且具有致癌、致畸、致突变作用，其代谢物还对人类健康有恶性影响。因此，许多国家已经明令禁止在饲养动物源性食品过程中使用呋喃它酮，并规定了在动物源性食品中的检验检疫标准。

目前用于检测呋喃它酮及其代谢物的方法主要有传统的检测方法，如分光光度法、高效液相色谱法及其联用技术等，以上方法虽然可以精确定量，但由于设备仪器昂贵，检测时间长，且需专业人员操作，因此无法实现真正意义上的现场检测；以及免疫学检测技术，此方法具有高特异性和高选择性的特点，非常适用于复杂基质痕量组分的分离或检测，随着学科间的相互渗透，其检测方法层出不穷，应用范围亦日益扩大，与传统检测方法相比，免疫学检测技术具有经济、快速、技术要点低、操作简便等特点。免疫分析检测技术是近年来在环境及食品检测等领域开发出来的一种新型快速准确检测方法，现已逐渐成为世界各国有毒有害残留物快速筛选检测的主要方法之一，也为呋喃它酮的检测提供了新的途径。

虽然呋喃它酮代谢物本身具有活性基团，但由于其分子量较小，空间结构不突出，直接制备的人工抗原存在灵敏度低的重大不足，无法满足现有市场的需求。因此需先通过化学方法设计出其半抗原，再进一步与载体蛋白结合获得具有免疫原性的完全抗原。

在专利公告号为“CN200910085648.2”的专利文件中，其检测的目标物为呋喃它酮原料药，但由于呋喃它酮进入动物体内后会代谢为AMOZ，而AMOZ又对人体有巨大的伤害，因此只检测呋喃它酮原料药存在重大缺陷，无法满足市场要求。

在专利公告号为“CN20160372606.7，CN201610207332.6，CN201210176537.4”的专利文件中，其设计的半抗原结构均无法保留其待测目标物的硝基端，使得半抗原、抗原制备获得的抗体均存在特异性差、亲和力低等不足。

在专利公告号为“CN201410154388.0，CN201410154389.5”的专利文件中，虽然可直接检测呋喃它酮代谢物，但是其制备的抗体的IC50值为15.16ppb，灵敏度低，无法达到国际检测限(0.5ppb)的要求。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服传统的AMOZ半抗原无法完整保留竞争物的特征结构，提供一种呋喃它酮代谢物AMOZ衍生化半抗原、人工抗原的制备方法及其应用，其可保留竞争物硝基端的半抗原，人工抗原，提高竞争物的特异性。

本发明解决该技术问题所采用的技术方案是，一种呋喃它酮代谢物的半抗原，为如下结构式Ⅲ：

本发明解决该技术问题所采用的另一技术方案是，一种呋喃它酮代谢物的半抗原的制备方法，步骤如下：

(a)将化合物Ⅰ溶解于乙醇中，所得溶液通过添加6mol/L的氢氧化锂溶液将PH值调至10-11，反应获得化合物Ⅱ；

所述化合物Ⅰ的结构式如下：

所述化合物Ⅱ的结构式如下：

(b)将所述化合物Ⅱ与呋喃它酮代谢物AMOZ在甲醇条件下反应，既得所述呋喃它酮代谢物的半抗原，其为如下结构式Ⅲ；

本发明解决该技术问题所采用的另一技术方案是，一种呋喃它酮代谢物的半抗原的制备方法，步骤如下：

(a’)将化合物Ⅰ溶于乙醇中，所得溶液通过添加6mol/L的氢氧化锂溶液将PH值调至10-12，室温反应15-26h，加入纯化水，所得溶液通过添加1M的稀盐酸将PH值调至4-5，过滤得到化合物Ⅱ，所述化合物Ⅰ反应生成所述化合物Ⅱ的过程如下：

(b’)将所述化合物Ⅱ溶解于甲醇中，加1.2-1.5摩尔当量的呋喃它酮代谢物AMOZ，于60～70℃进行反应，反应完毕，过滤，既得所述呋喃它酮代谢物的半抗原，其为结构式Ⅲ，且所述半抗原的反应过程如下：