[发明专利]抗原肽RACGAP1-1和RACGAP1-2在制备治疗肝癌药物中的应用

说明书

本发明涉及医药技术领域，具体是抗原肽RACGAP1‑1和RACGAP1‑2在制备预防和/或治疗肝癌药物中的应用，所述的抗原肽RACGAP1‑1和RACGAP1‑2的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示。本发明提供的可用于肝癌治疗的两条抗原肽RACGAP1‑1和RACGAP1‑2，可以负载树突状细胞诱导并获取大量具有特异性识别肝癌细胞的CTL，并可在体内显著杀伤肝癌实体瘤，可用于制备预防或治疗肝癌的药物。

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体地说，是抗原肽RACGAP1-1和RACGAP1-2在制备治疗肝癌药物中的应用。

背景技术

肝细胞肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是一种起源于肝细胞的恶性肿瘤，是人类主要的恶性肿瘤之一，据世界卫生组织(WHO)报告，全世界每年有约100万人死于肝癌。肝癌死亡率很高，我国肝癌发病率居世界之首,肝癌是我国第2位癌症杀手，是全球第3位癌症死因。器官移植是治疗肝癌晚期唯一有效的手段，但仍存在供肝数量逐年减少以及急性、慢性排斥反应所导致的移植物存活时间短等诸多问题，放疗、化疗虽然一定程度上抑制肿瘤的生长和转移，但对正常肝细胞造成的损伤以及复发率高的问题仍未得到有效解决。

近年来针对实体瘤的免疫治疗逐渐成为肿瘤学研究的热点。生物体对肿瘤细胞识别杀伤过程中，细胞免疫、特别是细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic lymphocyte,CTL)发挥着核心作用。在此过程中，肿瘤细胞被抗原递呈细胞(antigen-presenting cell，APC)吞噬后，其癌细胞特有的蛋白可以被蛋白酶水解形成肽段，并在内质网中与主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex，MHC)I类分子结合，形成复合物，后被运送到细胞表面进行抗原递呈，诱导特异性CTL增殖。CTL可以识别肿瘤细胞上的抗原肽与MHC的复合物，对肿瘤细胞进行杀伤。根据这一原理，可以通过选取肿瘤内特异性蛋白设计抗原肽，来诱导肿瘤特异性CTL。

随着大数据时代的到来，循证医学逐渐取代经验医学成为科学诊断和治疗的切入点，以大数据为背景，进行科研研究逐渐成为主流。Oncomine、TCGA等含有大量肿瘤临床样本数据的数据库得到国内外学者的广泛关注，并越来越多的运用到肿瘤的研究中来，2013-2016年多篇研究工作发表在Nature、Science等顶级杂志。但是目前，利用大数据进行肝癌研究的多关注于肝癌发生发展过程中分子机制，而较少关注肿瘤抗原肽的开发。

发明内容

本发明根据现有肝癌公开数据，设计了一套利用差异分析挖掘肝癌高表达分子、后用ENCODE数据库数据剔除可能引起自身免疫反应抗原的筛选方案。鉴于I型HLA中，位于HLA-A基因座0201型等位基因在人群中分布极为广泛，其表达产物HLA-A*0201在肿瘤的抗原递呈过程中起着非常重要的作用，且与HLA-A*0201发生结合的CTL表位长度被限制在9±1个氨基酸残基。因此，本发明利用网络软件在线计算出潜在的抗原九肽，鉴定出在以HLA-A*0201阳性肝癌细胞癌患者为对象的免疫疗法中有效的、与HLA-A*0201结合并递呈在人CTL上的肽段。在裸鼠移植瘤模型中回输负载后的肿瘤抗原肽后的树突状细胞(dendriticcell，DC)与T细胞，证明使用该肽有效。

本发明提供一种鉴定发现肝癌抗原肽的方法，具体是指通过公开的肝癌测序或芯片数据分析，筛选出肝癌高表达的基因，并通过ENCODE数据库过滤表达于成年人其他组织中的分子，进而设计与HLA-A*0201发生结合的抗原九肽，负载DC诱导CTL后，通过体外杀伤实验与裸鼠移植瘤模型筛选获得有效的抗原肽。

本发明的主要技术方案如下：