[发明专利]AMACR蛋白在制备肝癌术后预后评估试剂盒中的应用及试剂盒

说明书

(一)技术领域

本发明涉及AMACR蛋白在制备肝癌术后预后评估试剂盒中的应用及试剂盒。

(二)背景技术

我国为原发性肝癌高发地区，全世界每年新发病例的55％发生在中国大陆，为我国癌症死因的第二位。经过50多年发展，目前已经确立了以手术切除为主的综合治疗模式，肝癌治疗取得明显效果。但肝癌术后5年内复发转移率高达50％～70％，肝癌易复发转移的生物学特性是目前进一步提高肝癌治疗效果的瓶颈问题，已成为近年来临床和基础研究的热点方向之一。研究表明，肝癌术后复发转移最早可在术后2个月以内；术后1～2年为复发转移的高发期。Shimul等报道56例肝癌根治术后复发病人，1年内复发21例(38％)，1年后复发31例(55％)；并发现复发后生存率与复发时间密切相关：术后1年内复发者3年生存率显著低于年后复发者(Shah SA.,J Am Coll Surg 2006)。Hayashi等观察了肝癌术后复发时间与预后间的关系，1年内复发患者1、3、5年生存率分别为75.7％、36.6％和28.3％，远低于2年后复发的生存率(1、3、5年生存率分别为100％、92.2％和68.6％)。可见肝癌术后1年内复发的比例较高，且对生存率有明显影响。因此有必要寻找肝癌术后近期复发转移的预后指标，以指导临床针对高危人群采取防治措施，提高肝癌生存率。目前临床主要依靠定期复查和影像学检查来发现术后的复发转移；在中国阳性的肝癌只有70～80％，CT或B超难以发现小于1CM的肝癌，诊断中均存在盲区，不能准确及时预测。本项目拟寻找肝癌术后早期转移复发的标志分子，并进行大样本的临床验证，考察其在肝癌术后预后判断的意义；项目的开展对于提高肝癌术后预后的准确性具有重要的意义。

申请人课题组前期采用iTRAQ标记的定量蛋白质组学技术(2D-LC-MS/MS技术)开展了肝细胞癌根治术后近期复发转移的差异表达蛋白质组研究，筛选出了一系列可能与肝癌的早期转移复发相关的蛋白分子；其中包括α甲酰基辅酶A消旋酶(AMACR)。AMACR(P504S)基因定位于染色体，编码382个氨基酸；存在于过氧化物酶体和线粒体上；在支链脂肪酸及脂肪酸衍生物的β氧化和胆酸代谢中间产物的氧化中发挥重要作用。目前已经有广泛的研究证明AMACR过表达于前列腺癌中；已经成为前列腺癌诊断的分子标志物之一；在外科病理诊断中，其与34βE12、p63联合检测已经成为前列腺癌诊断的常用方法。目前进一步的研究证明，除了在前列腺癌中过表达外也与其他恶性肿瘤相关；在消化道中，AMACR可在75％的结肠腺瘤和大多数中、高分化结肠腺癌中表达；但在正常胃、小肠和结肠上皮中表达阴性。

申请人课题组结合定量蛋白质组学筛选的结果，开展了AMACR在肝细胞性肝癌术后转移复发的临床样品中的组织芯片研究；研究结果表明，AMACR可能与肝癌术后的预后相关：在极早期(6个月内)转移复发的病人组织标本中，AMACR的表达显著下调(免疫组化的阳性率仅15％)；而在到月转移复发的病人组织标本中，AMACR的表达显著上调(免疫组化的阳性率高达90％)；而在二年以后转移复发(或未转移复发)的病人组织样品中，免疫组化的阳性率为40％。从我们实验数据可以看出，表达量的在肝癌术后的病人组织中复杂多变；与手术后转移复发的时间密切相关(也与肿瘤的恶性程度相关，在前列腺癌中已经有类似报到)。

肝癌做为对人类健康威胁最大的肿瘤之一，至今其发生的分子机制仍不清楚，对其的治疗也缺少特异性的分子靶点，而AMACR做为十分重要的肿瘤癌基因，目前尚无文献报道AMACR蛋白与判断肝癌预后相关。

(三)发明内容

本发明目的是提供AMACR蛋白在制备肝癌术后预后评估试剂盒中的新应用及试剂盒。

本发明采用的技术方案是：

AMACR蛋白在制备肝癌术后预后评估试剂盒中的应用。

优选的，所述AMACR蛋白氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

本发明人经过广泛而深入的研究，首次发现，采用免疫组化方法检测AMACR蛋白在肝癌组织中的相对表达量，能够判断肝癌患者出现肝癌复发转移的风险。基于AMACR蛋白表达量与肝癌复发转移的相关性，以该蛋白作为预后标记物对其表达量进行检测可以用于指导肝癌的预后判断，因此可将AMACR蛋白作为分子标记，利用AMACR单克隆抗体或多克隆抗体，结合免疫组化实验试剂，检测AMACR蛋白在肝癌组织中的相对表达量。

所述试剂盒主要包括：人源AMACR单克隆抗体或多克隆抗体、免疫组化实验试剂。所述免疫组化实验试剂为本领域免疫组化实验中的常用试剂。