[发明专利]一种促进高山被孢霉产EPA的发酵培养基及其应用

说明书

本发明涉及一种促进高山被孢霉产EPA的发酵培养基，其组成为淀粉50g/L、豆粕提取物30‑70g/L、硝酸钾0‑10g/L、磷酸盐1g/L、七水合硫酸镁0.25g/L，余量为水；所述发酵培养基的pH值为6.0‑8.0。本发明实现高山被孢霉CCFM695在常温环境下的EPA产量大幅提高，EPA产量达到了1.7g/L，比原始条件增产约3倍。

【技术领域】

本发明涉及培养基，特别涉及一种含有豆粕提取物的发酵培养基，以及所述培养基在促进高山被孢霉产EPA中的应用。

【背景技术】

EPA(全顺式-5、8、11、l4、17-二十碳五烯酸)是一种ω-3系列长链多不饱和脂肪酸，具有抗凝血、抗癌、抗炎、防心血管病、降血脂等特殊生理功能，在医药保健品、食品和饲料行业均有较多的应用。EPA的生物来源主要包括海洋鱼类和微生物发酵生产，微生物发酵法生产EPA原料丰富、周期短、价格便宜、占地面积小、不受气候影响等，越来越受关注。目前通过微生物发酵法生产EPA的商业化产品是杜邦公司报道的New Harvest^TMEPAoil和salmon，所用菌株是解脂耶氏酵母基因工程菌。高山被孢霉油脂含量丰富，目前已是花生四烯酸(AA)的商业化生产菌。野生型高山被孢霉需在低温下合成EPA，且产量较低。中国发明专利申请CN2016101289357公开了一株高产EPA的重组高山被孢霉MA-oPaFADS17-3(它同样被命名为CCFM695)，该菌株是通过在野生型高山被孢酶中过表达来源于瓜果腐霉的ω-3脂肪酸脱饱和酶，最终得到成功表达候选ω-3脂肪酸脱饱和酶的高山被孢霉重组菌株。据记载，将该重组菌接种于Broth培养基中，在28℃200rpm摇床培养7d，测得其EPA(C20:5)的产量达到617.1mg/L，占总脂肪(TFA)的18.7％，而且表现出高效率地将AA催化转化为EPA，转化率达到49.9％。为进一步提高其EPA产量，本发明对其培养基组成进行了优化。

【发明内容】

本发明的目的克服现有技术缺陷，在降低发酵成本的前提下通过优化发酵培养基的组成配方，进一步提高高山被孢霉CCFM695在常温条件下的EPA产量。

为了实现上述目的，本发明提供豆粕提取物在促进高山被孢霉产EPA中的应用。

进一步地，本发明提供豆粕提取物在高山被孢霉发酵培养基中作为氮源的应用。

在本发明中，豆粕提取物的制备方法是：以重量计，取豆粕1份，加入5份水，煮沸并保持沸腾10-30min；所得产物用双层纱布过滤，弃去滤渣，所得滤液冷却至室温，即为所述豆粕提取物。

优选地，所述豆粕提取物在高山被孢霉发酵培养基中的浓度是10-70g/L。

本发明还提供一种发酵培养基，所述发酵培养基组成如下：

所述发酵培养基的pH值为6.0-8.0；

所述磷酸盐选自磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢钠和磷酸氢二钠中的一种。

在本发明中，所述淀粉是玉米淀粉、可溶性淀粉或马铃薯淀粉。

本发明还提供上述发酵培养基作为高山被孢霉产EPA的培养基的应用。

以下详细解释本发明的技术方案。

本发明以中国发明专利申请CN 2016101289357公开的高山被孢霉MA-oPaFADS17-3(它同样被命名为CCFM695)作为对象。该菌株是通过过表达来源于瓜果腐霉的ω-3脱饱和酶oPaFADS17基因的重组高山被孢霉，该菌株于2015年10月12日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.11394。