[发明专利]一种生物酶快速筛选高效石油降解菌株的方法

权利要求书

1.一种生物酶快速筛选高效石油降解菌株的方法，包括以下步骤：

将经高通量初筛获得的具有石油降解能力的菌株进行细胞破碎制备粗酶液，将粗酶液按体积比1：(90～110)的比例加入石油降解率检测体系中，反应1～24h，以石油降解率作为筛选指标，当石油降解率满足≥30％条件时，筛选菌株即为高效石油降解菌株。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述高通量初筛的步骤为：在364微孔板上加入含有石油的无机盐培养基，随机接入预先分离的石油降解菌株，在温度为30～37℃的条件下于含有石油的无机盐培养基中培养6～8天，当OD₆₀₀达到0.5以上时，初步筛选获得石油降解菌株。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述含有石油的无机盐培养基组分如下：

磷酸二氢钾0.5g/L，磷酸氢二钾0.5g/L，硫酸镁0.2g/L，氯化钙0.1g/L，氯化钠0.2g/L，硫酸铵1.0g/L，蛋白胨2g/L，石油1～10g/L，pH 7.0。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述细胞破碎制备粗酶液的步骤如下：

将菌株培养液经离心，收集菌体；用菌体3～20倍体积的pH 6.0的PBS缓冲液重悬；在功率为190～500W的条件下超声破碎5～20min；在4℃条件下，经3000～10000rpm离心2～10min，取上清，制得粗酶液。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述粗酶液的蛋白浓度为0.5～20mg/mL。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，石油降解率检测体系为由PBS缓冲液配制的石油浓度为1g/L～10g/L的溶液体系。