[发明专利]一种检测ITPA94C>T基因多态性的引物及其PCR方法

说明书

技术领域

本发明属于医学生物技术领域。更具体地，涉及一种检测ITPA 94C>T基因多态性的引物及其PCR方法。

背景技术

临床上，硫嘌呤类药物（巯基嘌呤类药物）应用广泛。但是，该类药物的不良反应发生率较高，包括骨髓抑制、肝脏损害、胃肠紊乱、胰腺炎和流行感冒样症状等。

目前的研究认为，巯基嘌呤类药物的不良反应可能与药物的代谢途径及基因多态性有关。巯基嘌呤甲基转移酶（thiopurine methyltransferase，TPMT）和三磷酸肌苷焦磷酸酶（inosine triphosphate pyrophosphatase，ITPA）是巯基嘌呤类药物的代谢酶，其中TPMT是巯基嘌呤类药物代谢的关键酶，TPMT和ITPA存在明显的遗传多态性。但是仍然有部分患者的不良反应的发生，无法解释。

发明内容

本发明的目的是提供一种用PCR方法检测ITPA 94C>T基因多态性位点的引物对ITPAwtF/ITPAwtR和ITPAmtF/ITPAmtR。可以根据电泳结果确定ITPA 94C>T基因多态性位点的基因型，结合个体的其他生物学指标对于巯基嘌呤类药物的疗效和副作用进行预测，克服了临床选择巯基嘌呤类药物的盲目性，在基因型分析的基础上可以预测患者使用巯基嘌呤类药物的有效性和安全性，指导临床用药，使患者能够进行个体化医疗。

本发明的另一目的是提供上述引物对ITPAwtF/ITPAwtR和ITPAmtF/ITPAmtR在制备通过PCR扩增生物样品检测ITPA 94C>T基因多态性位点的试剂中的应用。

本发明的再一目的是提供一种包含上述引物对ITPAwtF/ITPAwtR和ITPAmtF/ITPAmtR的ITPA 94C>T基因多态性位点检测试剂盒。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：

一种用PCR方法检测ITPA 94C>T基因多态性位点的引物对ITPAwtF/ITPAwtR和ITPAmtF/ITPAmtR，其序列分别如SEQ ID NO.1～4所示。

上述引物对ITPAwtF/ITPAwtR和ITPAmtF/ITPAmtR在检测生物样品ITPA 94C>T基因多态性位点方面的应用，也在本发明的保护范围之内。

一种通过PCR扩增生物样品检测ITPA 94C>T基因多态性位点的方法，是以待测生物样品的DNA为模板，以上述引物对ITPAwtF/ITPAwtR和ITPAmtF/ITPAmtR进行PCR扩增，根据扩增结果确定ITPA 94C>T基因多态性位点的基因型。

其中，所述待测生物样品为患者外周血。

优选地，所述PCR扩增的反应体系为25μl，包括：DNA模板3μl，10×Taq buffer 2.5μl，0.25mmol/L dNTPs 2μl，10μmol/L上下游引物各1μl，5U/μl ExTaq® 0.15μl，余量ddH₂O。

优选地，所述PCR扩增的反应条件为：95℃ 5min；94℃ 30s，66℃/80℃ 30s，75℃ 15s，35个循环；75℃ 5min；4℃保存。

另外，上述引物对ITPAwtF/ITPAwtR和ITPAmtF/ITPAmtR在制备通过PCR扩增生物样品检测ITPA 94C>T基因多态性位点的试剂盒中的应用，以及包含上述引物对ITPAwtF/ITPAwtR和ITPAmtF/ITPAmtR 的ITPA 94C>T基因多态性位点检测试剂盒，也在本发明的保护范围之内。

优选地，所述试剂盒还含有dNTPs、ExTaq聚合酶。

优选地，所述试剂盒还含有0.25mmol/L的dNTPs、5U/μl的ExTaq聚合酶。

本发明上述引物对ITPAwtF/ITPAwtR和ITPAmtF/ITPAmtR以及用PCR方法检测ITPA 94C>T基因多态性位点的方法和试剂盒，可以用于检测ITPA 94C>T基因多态性位点的基因型。

本发明的引物对ITPAwtF/ITPAwtR和ITPAmtF/ITPAmtR以及用PCR方法可以检测ITPA 94C>T基因多态性，ITPA 94C>T基因多态性与巯嘌呤类药物不良反应有关，可根据扩增电泳结果确定ITPA 94C>T基因多态性位点的基因型，对巯基嘌呤类药物的疗效和副作用进行预测，预测患者使用巯基嘌呤类药物的有效性和安全性，指导临床用药，使患者能够进行个体化医疗。