[发明专利]一种含不同来源脂肪酶的饲料添加剂及其在黄羽肉鸡饲料中的应用

权利要求书

1.一种含不同来源脂肪酶的饲料添加剂，其特征在于，由下述重量百分比的组分组成：鸡胰脂肪酶40%-60%，黑曲霉脂肪酶40%-60%。

2.根据权利要求1所述的含不同来源脂肪酶的饲料添加剂，其特征在于：由下述重量百分比的组分组成：鸡胰脂肪酶45%-55%，黑曲霉脂肪酶45%-55%。

3.根据权利要求1或2所述的含不同来源脂肪酶的饲料添加剂，其特征在于：所述鸡胰脂肪酶是通过下述方法制备的：

粗鸡胰脂肪酶的制备；

鸡胰脂肪酶的分离纯化；

（21）硫酸铵沉淀；

（22）超滤浓缩；

（23）葡聚糖凝胶（Sephadex G-100）分子过滤层析；

（24）SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测。

4.根据权利要求3所述的含不同来源脂肪酶的饲料添加剂，其特征在于：所述粗鸡胰脂肪酶的制备包括下述步骤：

（11）将鸡胰腺捣成胰浆，加入缓冲液，4℃条件下磁力搅拌2h；

（12）过滤，取溶液，1500rpm-2000rpm离心去除第一沉淀物，溶液加入丙酮，继续磁力搅拌25min-40min，然后在4℃条件下， 1500rpm-2000rpm离心15min-30min，第二沉淀物用75%丙酮溶解搅拌，再离心，得第三沉淀物；

（13）干燥第三沉淀物，得固体粉末；

（14）将所述固体粉末加入到4℃的氯仿-甲醇（氯仿与甲醇的体积比为2:1）中，磁力搅拌15min-30min，然后在4℃条件下、1500rpm-2000rpm离心，得第四沉淀物，第四沉淀物溶于乙醚中，再在4℃条件下、1500rpm-2000rpm离心，得第五沉淀物，第五沉淀物溶于丙酮中，再将第五沉淀物干燥，得粗酶粉。

5.根据权利要求3所述的含不同来源脂肪酶的饲料添加剂，其特征在于：所述步骤（21）硫酸铵沉淀包括下述步骤：

（211）、将上述粗酶粉溶于50ml去离子水中制成粗酶液，将装有50 mL粗酶液的小烧杯放在另一个装有少量冰水的大烧杯内，并置于磁力搅拌器上缓慢搅拌；

（212）、一边缓慢搅拌，一边缓慢加入10.00g、15.00g、20.00g、25.00g、30.00g、35.00g硫酸铵至终浓度为20%、30%、40%、50%、60%、70%（w/v），该步骤应在10 min内完成；然后继续搅拌15 min-20min；

（213）、接着10000 rpm离心8-12 min；弃去上清液，将沉淀悬浮于1~2倍沉淀物体积的0.05 mol/L pH 为7.5磷酸缓冲液，10000 rpm离心出去残留的不溶性物质；

（214）、测定上清液中的酶活力与蛋白质含量，计算浓缩酶液的比活力和纯化倍数；其中，比活力=酶活力单位/毫克蛋白质；纯化倍数=每步比活力/第一步比活力。

6.一种肉鸡饲料，其特征在于：该肉鸡饲料含有权利要求1至权利要求5中的任意一种含不同来源脂肪酶的饲料添加剂，饲料添加剂为0.01%-0.02%，基料为99.8%-99.9%。

7.根据权利要求6所述的肉鸡饲料，其特征在于：所述基料是基础日粮或者低能日粮。

8.根据权利要求7所述的肉鸡饲料，其特征在于：其中，所述基础日粮由下述重量百分比的组分组成：玉米50%-65%，豆粕15%-30%，玉米蛋白粉3%-6%，酒糟蛋白饲料(DDGS)4%-6%,四级大豆油2%-6%，次粉0.1%-5%，石粉1.3%-1.6%，磷酸氢钙0.6%-1.5%，食盐0.3%-0.4%，赖氨酸0.3%-0.5%，固体蛋氨酸0.4%-1.2%，苏氨酸0.2%-0.8%，第一预混料1%。

9.一种含有不同来源脂肪酶的饲料添加剂在黄羽肉鸡饲料中的应用。

10.一种含有不同来源脂肪酶的饲料对黄羽肉鸡回肠微生物多样性方面影响的应用。