[发明专利]利用通用TaqMan探针检测SNP的方法和试剂盒

权利要求书

1.用于检测基因组中的SNP或者插入或者缺失的试剂盒，所述试剂盒包含如下成分或者由如下成分组成：

（I）PCR引物组，所述引物组由以下引物构成：（1）第一正向引物，其由5’末端的第一通用尾部序列部分和3’末端的等位基因特异性序列部分构成；（2）第二正向引物，其由5’末端的第二通用尾部序列部分和3’末端的等位基因特异性序列部分构成；和（3）一条共用特异性反向引物，所述共用特异性反向引物是针对每条待扩增模板设计的特异性引物，但并非待检测SNP或者插入或者缺失的等位基因特异性引物，所述第一通用尾部序列和第二通用尾部序列选自以下(a)至(d)组：

(a) CAAGGTGACCAAGTTCAAGGT（SEQ ID NO: 1）；

CAAGGTCGGAGTCAACGCTTA（SEQ ID NO: 2）；

(b) CTGAACTTGGTCACCTTAGGT（SEQ ID NO: 3）；

CCGTTGACTCCGACCTTCGTA（SEQ ID NO: 4）；

(c) GAAGGTGACCAAGTTCATGCT（SEQ ID NO: 5）；

GAAGGTCGGAGTCAACGGATT（SEQ ID NO: 6）；和

(d) CTACGACACCAAGTTGATGCT（SEQ ID NO: 7）；

GAACGACGAAGTGAAAGGATT（SEQ ID NO: 8）；

和

（II）通用TaqMan探针组，所述通用TaqMan探针组的组成如下：（1）第一通用TaqMan探针，其是在5’末端和3’末端分别具有报告荧光团和淬灭基团的通用寡核苷酸序列；以及（2）第二通用TaqMan探针，其是在5’末端和3’末端分别具有报告荧光团和淬灭基团的通用寡核苷酸序列，所述通用TaqMan探针组选自如下探针组(e)至(g)：

(e) 5’-FAM-GTGACCAAGTTCATGCT-MGB-NFQ-3’

5’-VIC-TCGGAGTCAACGGATT-MGB-NFQ-3’；

(f) 5’-FAM-GAACTTGGTCACCTT-MGB-NFQ-3’

5’-VIC-CGTTGACTCCGACCTT-MGB-NFQ-3’；和

(g) 5’-FAM-ATCAACTTGGTGTCGTA-MGB-NFQ-3’

5’-VIC-CTTTCACTTCGTCGTT-MGB-NFQ-3’；

所述成分（I）和成分（II）分别在试剂盒中不同的盒中或者在同一盒中。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述淬灭基团连接有小沟结合物MGB基团，所述小沟结合物MGB基团选自：CC 1065类似物，偏端霉素，纺锤菌素，贝尼尔，多卡米星，喷他脒，4,6-二氨基-2-苯基吲哚，吡咯并[2,1-c][1,4]苯二氮和二氢环化吲哚卟啉三肽(DPI3)。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述小沟结合物MGB基团将寡核苷酸序列的熔融温度（Tm）提高3℃至10℃。