[发明专利]一种越橘提取物的鉴别及其中原花青素含量的测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种植物提取物的鉴别及其中原花青素含量的测定方法，具体涉及一种越橘提取物的鉴别及其中原花青素含量的测定方法。

背景技术

原花青素(Proanthocyanidins，PC)是植物中广泛存在的一大类多酚化合物的总称，属于生物类黄酮，由不同数量的儿茶素或表儿茶素聚合而成，其最高平均聚合度达十五聚体。按聚合度的大小，通常将二至四聚体称为低聚原花青素(简称OPC)，将五聚体以上的称为高聚原花青素(简称PPC)。原花青素是目前国际上公认的清除人体内自由基最有效的天然抗氧化剂，同时还具有良好的抗癌、抗炎、调节血压、保护视力、软化血管等作用，是多种功能性食品的有效成分，其来源广泛，葡萄籽、银杏叶、越橘、樱桃、玫瑰花、松树皮中均含有原花青素。由于原花青素的多种健康功能，近年来从植物中提取的各种原花青素已广泛应用于各类保健食品中，其成分鉴别和含量测定是评价保健食品功能的重要指标。

目前对原花青素的检测方法主要有分光光度法和高效液相色谱法。

分光光度法的基本原理是利用原花青素在无机酸存在和加热的条件下被降解，产生红色的花青素，在546nm处有最大吸收，通过分光光度计测定原花青素在水解过程中生成的花青素离子，从而测定原花青素类化合物。此方法具有代表性的是2003版的《保健食品评价与技术规范》。此法虽能测得原花青素总量，但方法中规定的原花青素对照品过于笼统(葡萄籽提取物，纯度95％)，不易购得，准确度较低，且该方法不能鉴别原花青素成分及来源。

高效液相色谱法的基本原理是样品经过前处理后，利用HPLC色谱柱将原花青素中的各类组分分离，再用标准品定量。此法不仅可鉴别原花青素的成分及来源，还可测定原花青素含量，但由于原花青素的组分黄烷-3-醇类的立体异构化，原花青素以许多立体异构体形式存在，且各聚合体和同聚异构体之间极性相近，因此，利用HPLC对原花青素进行分离分析和结构表征非常困难，目前有关利用HPLC对原花青素进行定性定量的研究也仅限于原花青素单体及低聚体。

由于不同来源原花青素提取物的产品价格差异较大，各类原花青素产品检测标准较低，且检测主要集中于原花青素含量，导致一些商家将低价格的原花青素产品掺加到高价格产品中，以次充好，扰乱市场，甚至危害食用者的健康和安全。对比市场目前几个厂家的原料发现，质量不一，液相色谱图与SW/T 22013国际商务标准中标准品液相色谱图的出峰情况差别较大，因此市售越橘提取物存在真假混淆的可能。

目前用于鉴别越橘提取物的方法采用SW/T 2-2013国际商务标准经高效液相色谱(HPLC)法进行分析检测，通过样品与标准品液相色谱图的比对鉴别越橘提取物的真假；原花青素含量的测定采用《保健食品检验与评价技术规范》2003版“保健食品中原花青素的测定”，通过分光光度法测定原花青素在水解过程中生成的花青素离子，从而测定原花青素类化合物。由于越橘提取物的鉴别和其中原花青素含量的测定方法相互独立，步骤繁琐，且通过分光光度法测定原花青素的含量，其测定结果易受越橘提取物中所含花青素的影响，造成测定结果不准确。

发明内容

本发明的目的就是为了克服现有技术中越橘提取物的鉴别和其中原花青素含量的测定方法相互独立、步骤繁琐、测定结果不准确的技术问题，提供一种简单、快速、准确的越橘提取物的鉴别和其中原花青素含量的测定方法。

本发明解决技术问题所采用的技术方案是：采用高效液相色谱法，提供一种越橘提取物的鉴别及其中原花青素含量的测定方法，包括以下步骤：

(1)供试样品的制备：称取100mg～150mg供试越橘提取物原料于25mL容量瓶中，加入20mL甲醇，超声处理20min～30min，冷却至室温后，加甲醇定容至刻度，摇匀，以4000r/min离心20～30min后，取上清液备用；

(2)经水解供试品溶液的制备：将正丁醇与盐酸按95∶5的体积比混合后，制得正丁醇与盐酸的混合溶液，取出18mL正丁醇与盐酸的混合溶液置于具塞锥瓶中，再加入0.6mL硫酸亚铁铵溶液和3mL步骤(1)中制备的试样溶液，混匀，置98℃～100℃沸水浴回流，加热1h后立即置2℃～10℃冷水中冷却，再用10％磷酸水溶液定容至25mL容量瓶中，经0.45μm微孔滤膜过滤后，即得经水解处理的供试品溶液A；

(3)未经水解供试品溶液的制备：取18mL步骤(2)制得的正丁醇与盐酸混合溶液于25mL容量瓶中，加入0.6mL硫酸亚铁铵溶液和3mL步骤(1)中制备的试样溶液，用10％磷酸水溶液定容至刻度，经0.45μm微孔滤膜过滤后，即得未经水解处理的供试品溶液B；