[发明专利]宠物睾丸组织冻存复苏试剂以及冻存复苏方法

说明书

技术领域

本发明涉及睾丸组织冷冻保存，更详细地说，本发明涉及宠物睾丸组织冻存与复苏试剂以及宠物睾丸组织冻存与复苏方法。

背景技术

宠物(主要指作为伴侣动物的狗和猫)能够陪伴人类，缓解日常生活中的压力，愉悦心情，促进人类健康，成为家庭中的一员。随着我国经济的发展、老龄化程度的加重，对宠物的需求越来越大。宠物数量增加的同时，宠物食品、宠物用品、宠物培训等产业得到了蓬勃的发展。宠物健康领域并没有受到足够的关注，也尚未形成规范。相比人类健康市场，宠物健康市场有很大的空间尚待挖掘。关爱宠物，关注宠物健康。

国内外一般推荐宠物在6到8月龄时进行绝育或去势手术。主要优点包括避免很多与生殖激素相关疾病的发生，节省宠物主人在宠物生殖方面的时间花费，控制群体数量。

宠物的去势是指雄性宠物的睾丸及其附属组织摘除术。对于宠物个体而言，去势手术可以降低雄性宠物发生前列腺增生和感染的机率，减少会阴疝的发生率。

然而，切除睾丸之后，目前都将睾丸组织丢弃，宠物不仅丧失了生殖能力，体内的激素水平也遭到了破坏。长期的激素水平失调会造成宠物精神状态萎靡、行为异常，随着年龄的增长往往导致肥胖等代谢疾病。宠物的运动系统发育也会受到影响，关节韧带发育不良，骨质疏松等发病风险增高，还会增加骨肉瘤的发生率。

目前的处理方式无法给宠物二次选择的机会，绝育就意味着丧失生殖力与破坏激素水平。相比人类健康领域，睾丸组织冻存技术、精原细胞体外诱导分化技术和睾丸间质细胞体外培养技术在不断发展。理想的方式是通过冻存技术保存生殖力，在必要的时候可选择性的体外分化出精子来恢复生殖力，扩增间质细胞可用于自体回输恢复激素水平。宠物健康领域此类冻存技术尚没有得到开发和应用。

发明内容

发明要解决的技术问题

本发明的目的是提供一种快速高效的宠物睾丸组织冻存与复苏试剂以及冻存与复苏方法。

用于解决上述技术问题的方案

本发明包含宠物睾丸组织冻存试剂和宠物睾丸组织复苏试剂，成分明确稳定，保质期长，制备后可直接应用于宠物睾丸组织的冻存和复苏，使用方便，组织复苏活性高。本发明依托组织玻璃化冻存(快速冻存，直接从常温进入液氮)理论技术，冻存试剂中联合使用两种低温保护剂二甲基亚砜(DMSO)、丙二醇(PROH)，提高玻璃化效率的同时减低保护剂对细胞的毒性。首次将枸杞多糖(LBP)用于组织玻璃化冻存，在宠物睾丸组织冻存中效果远优于传统的蔗糖(SUC)；针对睾丸组织特性，冻存和复苏试剂中均添加胆固醇(CHO)，较大程度的保护了睾丸组织中精原细胞和精子的活性。

本发明的第一方面，提供了宠物睾丸组织冻存试剂组。

所述宠物睾丸组织冻存试剂组包括：

(1)冻存试剂1：枸杞多糖2～7W/V％，胆固醇0.5～5W/V％，二甲基亚砜6～14V/V％，丙二醇2～7V/V％，MEM培养基80～90V/V％；

(2)冻存试剂2：枸杞多糖8～10W/V％，胆固醇0.5～5W/V％，二甲基亚砜6～20V/V％，丙二醇5～15V/V％，MEM培养基70～80V/V％；

(3)冻存试剂3：枸杞多糖15～20W/V％，胆固醇0.5～5W/V％，二甲基亚砜6～20V/V％，丙二醇5～15V/V％，MEM培养基70～80V/V％。

较优的，所述冻存试剂组包括：

(1)冻存试剂1：枸杞多糖2～7W/V％，胆固醇0.5～5W/V％，二甲基亚砜6～14V/V％，丙二醇2～7V/V％，MEM培养基80～90V/V％，聚乙烯吡咯烷酮0.1～0.5W/V％，葡萄糖1～10W/V％；

(2)冻存试剂2：枸杞多糖8～10W/V％，胆固醇0.5～5W/V％，二甲基亚砜6～20V/V％，丙二醇5～15V/V％，MEM培养基70～80V/V％，聚乙烯吡咯烷酮0.1～0.5W/V％，葡萄糖1～10W/V％；

(3)冻存试剂3：枸杞多糖15～20W/V％，胆固醇0.5～5W/V％，二甲基亚砜6～20V/V％，丙二醇5～15V/V％，MEM培养基70～80V/V％，聚乙烯吡咯烷酮0.1～0.5W/V％，葡萄糖1～10W/V％。

较优的，所述冻存试剂组包括：

(1)冻存试剂1：枸杞多糖6W/V％，胆固醇2.5W/V％，二甲基亚砜10V/V％，丙二醇5V/V％，MEM培养基85V/V％；