[发明专利]同时检测肉鸡肝脏、肾脏和鸡肉中黄曲霉毒素B1和M1含量的超高效液相色谱方法

权利要求书

1.一种同时检测肉鸡肝脏、肾脏和鸡肉中黄曲霉毒素B1和M1含量的超高效液相色谱方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)提取待检测肉鸡的肝脏、肾脏或鸡肉组织中的黄曲霉毒素B1和M1，得到提取液；(2)将提取液进行净化、衍生；(3)采用超高效液相色谱进行定性定量测定。

2.按照权利要求1所述的超高效液相色谱方法，其特征在于，步骤(1)所述提取待检测肉鸡的肝脏、肾脏或鸡肉组织中的黄曲霉毒素B1和M1包括：将待检测肉鸡的肝脏、肾脏或鸡肉组织粉碎，加入提取溶剂，经超声处理后，摇床震荡，然后加入无水硫酸钠，离心，取上清。

3.按照权利要求2所述的超高效液相色谱方法，其特征在于，所述提取溶剂选自二氯甲烷、70％-100％甲醇溶液或84％乙腈溶液中的任意一种，优选为二氯甲烷；

更优选的，按照g/ml计，所述待检测肉鸡的肝脏、肾脏或鸡肉组织：提取溶剂＝1：10。

4.按照权利要求2所述的超高效液相色谱方法，其特征在于，所述超声的时间为10min；超声的功率为60Hz；

所述摇床震荡的时间为30-90min，优选为60min；所述摇床震荡的转速为400r/min。

5.按照权利要求2所述的超高效液相色谱方法，其特征在于，按照质量比计，所述待检测肉鸡的肝脏、肾脏或鸡肉组织：无水硫酸钠＝1：1。

6.按照权利要求1所述的超高效液相色谱方法，其特征在于，步骤(2)所述净化包括：将提取液通过黄曲霉毒素免疫亲和柱，收集洗脱液；

步骤(2)所述衍生的方法为三氟乙酸柱前衍生法；衍生后的产物经氮气吹干、定容，用于上样。

7.按照权利要求6所述的超高效液相色谱方法，其特征在于，所述黄曲霉毒素免疫亲和柱选自AFM1免疫亲和柱或AFB1免疫亲和柱中的任意一种，优选为AFM1免疫亲和柱；

所述定容用的溶液为10％-100％甲醇水溶液或10％-100％乙腈溶液，优选为10％甲醇水溶液。

8.按照权利要求1所述的超高效液相色谱方法，其特征在于，步骤(3)所述超高效液相色谱的条件包括：色谱柱为Waters Acquity UPLC BEHC18，规格为50mm×2.1mm×1.7μm；流速0.1-0.3mL/min；进样量为10μL；流动相为乙腈：水；柱温20-30℃；激发波长365nm，发射波长435nm。

9.按照权利要求8所述的超高效液相色谱方法，其特征在于：按照体积比计，所述流动相为乙腈：水＝15-30：70-85；优选的，所述流动相为乙腈：水＝20：80；

所述柱温为25℃；所述流速为0.2mL/min。

10.按照权利要求1所述的超高效液相色谱方法，其特征在于，步骤(3)定性定量测定包括：根据待检测黄曲霉毒素与黄曲霉毒素标准品的保留时间一致，确定为目标黄曲霉毒素；

根据黄曲霉毒素标准品浓度与色谱峰面积做线性回归，得到线性回归方程；将待检测肉鸡的肝脏、肾脏或鸡肉组织中黄曲霉毒素的峰面积带入线性回归方程，计算目标黄曲霉毒素的相应浓度。