[发明专利]NtRRS3基因及其在烟草抗青枯病中的应用

权利要求书

1.烟草CC-NBS-LRR类抗病基因NtRRS3，其特征在于：其核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示。

2.权利要求1所述烟草CC-NBS-LRR类抗病基因NtRRS3所编码的蛋白，其特征在于：其所编码的氨基酸序列为SEQ ID NO.2所示。

3.权利要求1所述烟草CC-NBS-LRR类抗病基因NtRRS3的超量表达载体，所述超量表达载体的构建方法在于：采用Gateway技术，通过引物对NtRRS3-OE-F：5’-GGGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTTCACCATGGCTTATGCTGC-3’和NtRRS3-OE-R：5’- GGGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTCCTAATGGATATGGACCTC-3’扩增获得不包括终止密码的NtRRS3基因的cDNA编码区片段，经BP反应将该目的片段连接到入门载体pDONR207中，再通过LR反应将该片段从入门载体pDONR207中转移到过表达载体pEarleyGate 205中，构建如图3A所示的p35S::NtRRS3-TAP过量表达载体。

4.权利要求1所述烟草CC-NBS-LRR类抗病基因NtRRS3的RNAi干扰载体，所述RNAi干扰载体的构建方法在于：采用酶切连接法，通过正向插入的引物对NtRRS3-RNAi-Xho I-F：5’-ATTACTCGAGTCTAATTGATATATGGAGGTGTG-3’、NtRRS3-RNAi-NcoI-R：5’- ATTACCATGGACAGAGGATTGTTAATGTTAGAG-3’和反向插入的引物对NtRRS3-RNAi-PacI-F：5’-ACCTTAATTAATCTAATTGATATATGGAGGTGTG-3’和NtRRS3-RNAi-BamHI-R：5’-ATTAGGATCCACAGAGGATTGTTAATGTTAGAG-3’，分别从岩烟97叶片cDNA模板中扩增得到NtRRS3基因的正反向插入片段，将其插入到酶切后的RNAi表达载体pGSA2285中，构建如图3B所示的NtRRS3-RNAi表达载体。

5.权利要求1所述的烟草CC-NBS-LRR类抗病基因NtRRS3或权利要求2所述的蛋白在烟草抗青枯病中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述应用的方法包括：（1）构建含有权利要求1所述的烟草CC-NBS-LRR类抗病基因NtRRS3的植物表达载体；（2）将所构建的植物表达载体转到烟草中；（3）培育筛选抗青枯病的转基因烟草新品种。