[发明专利]一种高产岩藻多糖酶的海洋交替假单胞菌及其应用

说明书

本发明提供一株高产岩藻多糖降解酶菌株，其保藏编号为CGMCC No.13477。本发明的微生物菌株用于生产岩藻多糖降解酶、本发明筛选的菌株所产生的岩藻多糖降解酶可以降解岩藻多糖硫酸酯，产生具有潜在生物学活性的寡聚岩藻糖硫酸酯。该微生物具有发酵周期短，酶活性高，且多数活性为胞内酶活等优良特性，有利于样品的收集及保存，为后续的工业化应用奠定了基础。

技术领域

本发明属于海洋微生物筛选技术领域，具体涉及一种高产岩藻多糖酶的海洋交替假单胞菌及其应用。

背景技术

岩藻多糖硫酸酯(Fucoidan)是褐藻细胞壁含有的一种水溶性多糖，主要由L-岩藻糖和不同硫酸酯化的L-岩藻糖组成。此外，还含有一定量的D-半乳糖、D-甘露糖、D-葡萄糖醛酸，少量的D-木糖和L-阿拉伯糖，是一种化学组成和结构都十分复杂的高分子量的酸性多糖化合物。研究发现，该类多糖具有抗氧化、降血脂、抗凝血、抗病毒、抗肿瘤、增强机体免疫力等各种生物学活性，且其生理活性与多糖分子量、硫酸根的含量及其取代位置有重要关系。因此，要深入研究该类多糖的构效关系，就需要对多聚糖进行降解，而该类多糖的定向降解有赖于特定降解酶的获得。利用该多糖降解酶获得系列寡糖，并从寡糖结构层面阐明其作用靶点，这是创新药物及系列功能寡糖制品开发的重要途径。

为了实现上述目标，岩藻多糖降解酶的获得至关重要。但由于该类酶存在活力较低等问题，该酶的商业化生产始终没有实现，因此筛选高活力产酶微生物菌株仍是一个重要的课题。

发明内容

本发明的目的在于提供一株高产岩藻多糖降解酶菌株，从而推动了岩藻寡糖的制备及应用，以弥补现有技术的不足。

本发明的第一个目的在于提供一株产岩藻多糖酶的交替假单胞菌(Pseudoalteromonas sp.)OU03株，该微生物菌株保存在位于北京市海淀区北辰西路1号院3号的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.13477，保藏日期为2016年12月22日。

本发明的微生物菌株用于生产岩藻多糖降解酶；

本发明还提供了一种用于诱导上述海洋微生物表达产生岩藻多糖降解酶的培养基，培养基的基本碳源为岩藻多糖硫酸酯；该菌株诱导产生的大部分酶活都集中在胞内，有利于后续活性酶的富集。

作为实施例的具体记载，所述的培养基的配方如下：岩藻多糖硫酸酯2g/L，蛋白胨1g/L，用海水配制后调节pH为7.6-7.8。

本发明另一个方面是提供一种制备岩藻多糖降解酶的方法，是使用筛选的菌株进行发酵制备岩藻多糖降解酶。

本发明筛选的菌株所产生的岩藻多糖降解酶可以降解岩藻多糖硫酸酯，产生具有潜在生物学活性的寡聚岩藻糖硫酸酯。该微生物具有发酵周期短，酶活性高，且多数活性为胞内酶活，有利于后续样品的收集及保存，为其工业化应用奠定了基础。

附图说明

图1：OU03菌的生长曲线图，

图2：诱导后OU03不同部位岩藻多糖酶降解活性图(DNS法)，

图3：诱导培养OU03产生的岩藻多糖酶的C-PAGE分析图，其中A为胞内酶；B为发酵液。

具体实施方式

本发明从海洋无脊椎动物消化腺来源的共生微生物中筛选获得了一株高产专一性的岩藻多糖酶的菌株，且多数活性为胞内酶活，有利于后续利用该菌株所产的酶进行规模化制备岩藻寡糖硫酸酯。

下面结合实施例对本发明进行详细的描述

实施例1：微生物的筛选及鉴定

1、微生物的筛选