[发明专利]苦碟子注射液指纹图谱检查方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种中药注射液质量检查方法，即苦碟子注射液指纹图谱检查方法。

背景技术

在现有技术中，苦碟子注射液（曾用名：碟脉灵注射液）列入国家药品标准产品（国药准字Z20025450），由通化华夏药业有限责任公司生产。

处方：抱茎苦荬菜1000g，制成1000ml。

含量测定：本品每10ml含总黄酮以无水芦丁（C₂₇H₃₀O₁₆）计，不得少于4.0mg。含抱茎苦荬菜以腺苷（C₁₀H₁₂N₅O₄）计，不得少于0.025mg。

功能主治：活血止痛，清热祛瘀。用于瘀血闭阻的胸痹，证见：胸闷、心痛，口苦，舌暗红或存瘀斑等。适用于冠心病、心绞痛见上述病状者。亦可用于脑梗塞者。

用法用量：静脉滴注，一次10－40ml，一日1次；用5%葡萄糖或0.9%氯化钠注射液稀释至250－500ml后应用；14天为一疗程；或遵医嘱。

规格：每支装（1）10ml，（2）20ml，（3）40ml。

中药注射剂质量的稳定、可控是临床用药安全、有效的保证。中药注射剂中化学成分具有复杂性和多样性，仅通过单个或几个化学成分的含量测定不能全面反映和控制中药注射剂的质量。这就需要建立一种合理有效的中药注射剂质量控制方法。目前，中药指纹图谱作为现代中药质量标准体系的核心技术已得到国际公认，FDA、WHO、德国、印度和日本等国家均采用指纹图谱技术作为植物药的质量控制手段。国家食品药品监督管理总局（CFDA）在中药注射剂安全性再评价指导原则中已明确要求中药注射剂必须设立指纹图谱检查项。由于目前苦碟子注射液质量标准中尚无规定指纹图谱检查项及检查方法。因此，本发明可以为苦碟子注射液指纹图谱检查提供方法，弥补质量标准的不足。

发明内容

本发明的目的是针对上述问题与需求，而建立一种苦碟子注射液指纹图谱检查方法。

本发明的技术解决方案是：建立苦碟子注射液指纹图谱检查方法，其特征步骤如下：

1、色谱条件与系统适用性试验：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，色谱柱：Waters Symmetry C18 4.6 mm×250 mm，5μm；以乙腈为流动相A，0.2%磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速为1.0ml/min；检测波长：260nm；柱温为40℃。理论板数按木犀草素7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷峰计算应不低于5000。

2、参照物溶液的制备：

取腺苷对照品、木犀草素7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷对照品和菊苣酸对照品，精密称定，加25%甲醇溶液制成每1mL含腺苷5μg、木犀草素7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷150μg和菊苣酸60μg的混合溶液，即得。

3、供试品溶液的制备：

取苦碟子注射液，用0.45 μm滤膜滤过，即得。

4、测定法：

精密吸取参照物溶液与供试品溶液各5μL，注入液相色谱仪，测定，记录75分钟内的色谱峰，即得。

苦碟子注射液中所含有的主要有效成分为腺苷、有机酸和黄酮类等成分，根据其化学性质，选择反相高效液相色谱法来进行指纹图谱分析。本发明采用的Waters Symmetry色谱柱得到的色谱峰峰形良好；流动相系统对苦碟子注射液中的主要成分有良好的洗脱和分离能力；在260nm的检测波长下，腺苷的响应值大，同时还能较为全面地检测到其他的主要成分。本发明建立的苦碟子注射液指纹图谱分析方法灵敏度高，分离度和重现性好，基线噪音小。

本发明指纹图谱中应呈现与腺苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷以及菊苣酸三个对照品色谱峰保留时间一致的色谱峰，并应出现10个共有峰，以1、2 (S)、3、4、5、6、7、8 (S)、9 (S)、10号峰为标记，经中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件计算，与对照指纹图谱相比较，相似度应不低于0.85。

图1中，峰2(S) 腺苷；峰3 尿苷；峰4鸟苷；峰5 单咖啡酰基酒石酸；峰7 木犀草素7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷；峰8(S) 木犀草素-7-O-β-D-葡糖醛酸苷；峰9(S) 菊苣酸；峰10 芹菜素-7-O-β-D-葡糖醛酸苷。